НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ТРЕХМЕРНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В МОЗГЕ МЫШЕЙ
Бесплатно
Основная коллекция
Издательство:
НИИ ноpмальной физиологии им. П.К. Анохина
Год издания: 2015
Кол-во страниц: 3
Дополнительно
Скопировать запись
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов.
Для полноценной работы с документом, пожалуйста, перейдите в
ридер.
References: 1. Lebedev M.Yu., Sholkina M.N., Znivtsov O.P // Fundamental Research. – 2013. № 12. P. 45-48. 2. Lambert C., Ibrahim M., Iobagiu C., Genin C. // J. Clin. Immunol. – 2005. – Vol. 25, № 5. – P. 418–427. 3. Nascimbeni M., Shin E.C., Chiriboga L. et al., // Blood. – 2004. – Vol. 104, № 2. – P. 478–486. DOI:10.12737/12345 НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ТРЕХМЕРНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В МОЗГЕ МЫШЕЙ Ефимова О.И.*, Анохин К.В.*,** *НИЦ «Курчатовский институт», **ФГБНУ «НИИНФ им. П.К. Анохина», Москва, Россия efimova_oi@nrcki.ru Ключевые слова: мозг, экспрессия генов, оптическое просветление, LUMOS Ориентация современных нейробиологических исследований и биомедицинской диагностики на анализ крупномасшабных нейронных сетей [2,4,5] требует разработки новых методов трехмерной микроскопии, обеспечивающей визуализиацию всего мозга и его структур с клеточным разрешением. Микроскопическая визуализация интактных нейрональных сетей в образцах целого мозга требует их оптической прозрачности и сохранности их трехмерной структуры, тонкой морфологии и флуоресцентных меток. В последнее время был разработан целый ряд методик получения оптически просветленных биологических образцов (напр., Scale, CLARITY, SeeDB, CUBIC, PARS, iDISCO и др.) [1,3]. Однако, у каждого из предлагаемых способов есть определенные ограничения. Для решения этих проблем мы разработали новый просветляющий состав LUMOS (LUminocity Maintaining Opticlearing Solution). LUMOS позволяет быстро проводить трехмерный микроскопический анализ генетически кодируемых флюоресцентных белков в целых структурах (гиппокамп, некортекс, обонятельные луковицы и др.) фиксированного мозга взрослых мышей. В отличие от других способов оптического просветления, при которых наблюдается уменьшение или увеличение линейных размеров биологического образца, водный раствор LUMOS не вызывает деформации ткани, сохраняя нативную трехмерную информацию. LUMOS сохраняет флуоресцентный сигнал репортерных белков в интактных структурах не менее 1 года. Двухстепенчатая процедура оптического просветления LUMOS, не требующая дорогих реактивов и оборудования, менее чем за 2 дня позволяет сделать образцы мозга равномерно прозрачными для последующей трехмерной микроскопии с клеточным разрешением и автоматического подсчета флюоресцентно меченых мишеней. Мы показали, что разработанный подход позволяет визуализировать флюоресцентные репортерные белки в препаратах целого мозга взрослых мышей трансгенных линий Thy1-EGFP, картировать локализацию вирусного вектора, кодирующего GFP, трансдуцированного в мозг мыши, а также проводить количественный анализ индуцированной новым