Лираглютид – новая ступень в терапии СД 2 типа

3/2008

Молекулярная основа медленной абсорбции аналога
человеческого ГПП-1 – лираглютида 
DORTE B. STEENSGAARD, JENS K. THOMSEN, HELLE B.
OLSEN and LOTTE B. KNUDSEN. Malov, Denmark. 
Лираглютид является близким по структуре аналогом
ГПП-1, к структуре которого просто добавлен C14-жирнокислотный остаток. Лираглютид имеет значительно более пролонгированный период полужизни и действия в сравнении с
эндогенным ГПП-1. Период полужизни после внутривенного
введения лираглютида человеку составляет 8 ч.; для ГПП-1;
период полужизни после подкожного введения составляет 13 ч.
Связывание с альбумином и повышенная метаболическая стабильность являются основой пролонгированного периода
полужизни, в то время как самоассоциация предполагается
основным механизмом, лежащим в основе замедленного всасывания, которое также значительно отличается от ГПП-1
(Tmax 10–12 ч. в сравнении с 1 часом при подкожном введении).
Таким образом, терапия аналогом человеческого ГПП-1 –
лираглютидом предполагает одократное его введение. 
В данном исследовании сравнивали лираглютид и его неацилированный предшественник Lys34-GLP-1(7-37) для того,
чтобы понять, каково влияние жирнокислотной цепи на размер
олигомеров и самоассоциацию лираглютида. Спектро скопия
кругового дихроизма, 1H NMR (с протонным ядерно-магнитным резонансом (ЯМР)), и аналитическое ультрацентрифугирование использовались для получения информации о процессе
диссоциации. Олигомерная масса лираглютида в растворе определялась с помощью аналитического ультрацентрифугирования. Данные показали, что лираглютид образует сильно самоассоциированную структуру в пределах 0,001 мМ–1,2 мM при
pH 8,0 и 100 мM NaCl. Отмечаемая молекулярная масса со ответствует гептамерной структуре. Мономеры лираглютида
не выявлялись даже при концентрации 0,001 мM, указывая на
то, что Kd (коэффициент диссоциации) был около ≤0,1 μM для
самоассоциации. Спектроскопия кругового дихроизма, эксклюзионная хроматография и протонный ЯМР с лираглютидом и
неацилированным предшественником 34R, GLP-1(7–37) подтвердили результаты значимости жирнокислотной цепочки.
Данные свидетельствовали о том, что жирнокислотная цепь
оказывает выраженный эффект на силу взаимодействия самоассоциированной структуры, значительно снижая Kd олигомерной связи в сравнении с неацилированным предшественником.
Сделан вывод о том, что жирнокислотная цепь лираглютида
является основной движущей силой для ассоциации в гептамерную структуру. Это свойство уникально для ацилированного
аналога ГПП-1 и приводит к тому, что фармакокинетический
профиль позволяет однократное введение препарата в виде простой лекарственной формы низкой вязкости самой современной
иглой размером, как минимум, 31G.

Молекулярные механизмы пролиферативного эффекта
аналога человеческого ГПП-1 для однократного
введения – лираглютид, на бета-клетки, на моделях
мышей с диабетом (db/db Mice); свидетельства механизма
подавления окислительного стресса 
MASASHI SHIMODA, YUKIKO KANDA, KAZUHITO 
TAWARAMOTO, MITSURU HASHIRAMOTO, 
MICHIHIRO MATSUKI and KOHEI KAKU. Okayama, Japan.
ГПП-1 увеличивает массу β-клеток, стимулируя их пролиферацию и подавляя апоптоз. В этом исследовании изучали
пролиферативный эффект лираглютида (ЛИРА) на массу
бета-клеток на моделях мышей с диабетом, db/db Mice. Мыши,
мужские особи, в возрасте 10 недель, получали ЛИРА (0,2 мг/кг

в режиме двух инъекций, подкожно), или контрольный раствор
(контрольная группа) в течение 2 недель (исследование 1), или
2 дней (исследование 2). С помощью гистологического анализа, включая метод PCNA (ядерный антиген пролиферирующих клеток) и иммунологического окрашивания 4-HNE (4гидроксиноненалом), изучались масса бета-клеток, пролиферация клеток и апоптоз методом TUNEL (TdT-опосредованное
dUTP-биотинилирование) оценивалась островковая ткань.
Экспрессия генов, специфичных для области панкреатических
островков анализировалась методом захвата лазерных частиц
RT-PCR (реверс-транскриптазной реакции полимеразной цепи
в режиме реального времени). Исследование 1: через 2 недели
исследования масса тела была достоверно ниже в группе
ЛИРА в сравнении с контрольной (42,1±0,5 г против 44,6±0,6 г,
средняя ± СО, p<0,01, n=10 для каждой группы). Гликемия натощак, уровень инсулина и триглицеридов были достоверно
ниже в группе ЛИРА, чем в контрольной (глюкоза 189±10,3
против 272±26,0 мг%, p<0,05; инсулин 4,3±0,5 против
6,4±0,7 нг/мл, p<0,05; и триглицериды 113±2,4 против 133±6,5 мг%,
соответственно p<0,01). Масса панкреатических β-клеток была
выше в группе терапии ЛИРА, чем в контрольной (7,7±0,7 в сравнении с 4,9±0,5 мг, p<0,01, n=5 для каждой группы). Содержание
триглицеридов в островках также снижалось на фоне терапии
ЛИРА. Число PCNA-положительных клеток увеличилось, но
количество 4-HNE-положительных клеток снизилось на фоне
терапии ЛИРА. По методу оценки TUNEL меньший апоптоз
β-клеток отмечался в группе терапии ЛИРА. Уровень факторов
транскрипции Neuro-D, ERK-1 и Циклина-D мРНК, был достоверно выше у мышей, получавших ЛИРА, в сравнении с контрольной группой. Отмечалось регулируемое снижение экспрессии генов SREBP-1 c (сигнального стероидсвязывающего протеина), протеина FAS и стресс-опосредованного XBP-1 гена
эндоплазматического ретикулума (ЭР), и регулируемое повышение экспрессии генов каталазы и GSHPx (глютатион-пероксидазы) через 2 недели интервенции лира. Исследование 2: Через 2 дня
терапии ЛИРА, уровень гликемии снизился в группе мышей,
получавших препарат. На фоне терапии ЛИРА отмечалось регулируемое повышение экспрессии генов Циклина-D и Hlxb-9
(гомеодоменового белка b9), маркера клеточной дифференциации и регулируемое снижение экспрессии Hes-1, маркера подавления дифференциации клеток. Экспрессия генов каталазы,
GSHPx и XBP-1 не отличалась между группами. 
Заключение. Лираглютид повышает массу β-клеток у
мышей с СД не только путем прямого действия на кинетику
клеток, но и через подавление окислительного стресса и
стресса эндоплазматического ретикулума, в связи со снижением глюко- и липотоксичности как хронического эффекта. 

Лираглютид индуцирует пролиферацию бета-клеток 
и обеспечивает защиту их от апоптоза, стимулированного
интерлейкином-1 бета в человеческих островках 
R. PRAZAK, S. RU..TTI, H. ELLINGSGAARD, L.B. KNUDSEN
and M.Y. DONATH Zurich, Switzerland and Maalov, Denmark. 
Аналоги глюкагон-подобного пептида-1 (ГПП-1) индуцируют пролиферацию бета-клеток и обладают эффектом, противодействующим апоптозу на моделях островков грызунов.
Однако этот эффект на человеческих островках изучен в
меньшей степени. Продукция интерлейкина 1-β (ИЛ-1-β) повышена в островковых клетках пациентов с СД 2 типа, и индуцирует апоптоз β-клеток. Целью исследования было определить,
влияет ли лираглютид, аналог человеческого ГПП-1 для однократного введения, на пролиферацию и апоптоз в человеческих островках. Островковые клетки мыши и человеческие

Лираглютид – новая ступень в терапии СД 2 типа

М.В. Шестакова 
ФГУ Эндокринологический научный центр Ромедтехнологий, Москва
(директор – академик РАН и РАМН И.И. Дедов)