Вестник Роcсийской академии медицинских наук, 2021, том 76, № 1
научно-теоретический журнал
Бесплатно
Основная коллекция
Издательство:
Педиатръ
Наименование: Вестник Роcсийской академии медицинских наук
Год издания: 2021
Кол-во страниц: 128
Дополнительно
Тематика:
ББК:
УДК:
ГРНТИ:
Скопировать запись
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов.
Для полноценной работы с документом, пожалуйста, перейдите в
ридер.
ISSN 0869-6047 (Print) ISSN 2414-3545 (Online) Научно-теоретический журнал. Выходит один раз в два месяца. Основан в 1946 г. Входит в Перечень ведущих научных журналов и изданий ВАК. Индексируется в базах данных Scopus, Embase, EBSCO, РИНЦ (Russian Science Citation Index на платформе Web of Science). Учредители: • Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российская академия наук» • Федеральное государственное бюджетное учреждение «Центральный научно-исследовательский институт организации и информатизации здравоохранения» Министерства здравоохранения Российской Федерации ВЕСТНИК РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК Печатное периодическое издание «Вестник Российской академии медицинских наук» зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций 16 сентября 1992 г. (Свидетельство о регистрации № 01574), перерегистрировано 27 марта 2020 г. (Свидетельство о регистрации ПИ № ФС77-78060). Редакция не несет ответственности за содержание рекламных материалов. Воспроизведение или использование другим способом любой части издания без согласия редакции является незаконным и влечет за собой ответственность, установленную действующим законодательством РФ Тираж 1000 экз. Подписные индексы: в агентстве «Почта России» — П4838. Свободная цена. Знаком информационной продукции не маркируется. Адрес редакции: 127254, г. Москва, ул. Добролюбова, 11 Издательство «ПедиатрЪ»: 117335, г. Москва, ул. Вавилова, д. 81, корп. 1, этаж 2, помещ. № XLIX, офис 2–8, Тел.: +7 (499) 132-02-07, http://vestnikramn.spr-journal.ru, e-mail: vramn@spr-journal.ru Отпечатано ООО «Буки Веди», 117246, г. Москва, проезд Научный, д. 19, этаж 2, ком. 6Д, офис. 202; тел.: +7 (495) 926-63-96, www.bukivedi.com, info@bukivedi.com. 2021/том 76/№1 Главный редактор: В.И. Стародубов Заместитель главного редактора: В.В. Береговых Научные редакторы: А.А. Кубанов, И.В. Маев Ответственный секретарь: Л.С. Коков Редакционная коллегия: В.Г. Акимкин, А.И. Арчаков, А.А. Баранов, Ю.В. Белов, С.А. Бойцов, Н.И. Брико, Е.К. Гинтер, П.В. Глыбочко, В.М. Говорун, Е.З. Голухова, А.М. Дыгай, А.М. Егоров, А.А. Камалов, А.Д. Каприн, А.В. Караулов, Р.С. Козлов, С.И. Колесников, А.А. Кубатиев, С.И. Куцев, А.В. Лисица, А.Д. Макацария, А.И. Мартынов, Г.А. Мельниченко, Л.С. Намазова-Баранова, Е.Л. Насонов, М.А. Пирадов, Н.В. Пятигорская, В.И. Сергиенко, Г.Т. Сухих, Д.А. Сычев, В.А. Тутельян, В.П. Чехонин, М.В. Шестакова Зарубежные члены редакционной коллегии: Д. Видера, В-Д. Гримм, М. Мюллер, Д. Риццо, Н.С. Сердюченко, В.Л. Фейгин, А. Хаверих, К. Шен, И. Шенфельд РИНЦ: • Impact Factor (5 лет) — 1,436 • Рейтинг SCIENCE INDEX (Медицина и здравоохранение) — 2 SCOPUS: • CiteScore 2019 — 0,8 (Q2) • SJR 2019 — 0,149 (Q4)
Published bimonthly since 1946. The journal is indexed in Scopus, Embase, EBSCO, Russian Science Citation Index (Web of Science). Founders: • Russian Academy of Sciences • Federal Research Institute for Health Organization and Informatics of Ministry of Health of the Russian Federation ANNALS OF THE RUSSIAN ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES Mass media registration certificate dated March, 27, 2020. Series ПИ № ФС77-78060. Federal Service for Supervision of Communications, Information Technology, and Mass Media. Editorial office takes no responsibility for the contents of advertising material. No part of this issue may be reproduced without permission from the publisher. While reprinting publications one must make reference to the journal «Annals of The Russian Academy of Medical Sciences» Edition 1000 copies. Subscription indices are in the catalogue Russian Post P4838. Free price. Not marked with content sign. Editorial Office: 11, Dobrolubov street, Moscow, 127254 Publisher «Paediatrician»: Office 2–8, Unit № XLIX, 81-1 Vavilova Street, 2nd floor, 117335, Moscow, Russian Federation, Phone: +7 (499) 132-02-07, http://vestnikramn.spr-journal.ru, e-mail: vramn@spr-journal.ru Printed at Buki Vedi Printing House, 19 Nauchny proezd, Moscow, Russia, 117246; tel.: +7 (495) 926-63-96, www.bukivedi.com, info@bukivedi.com. 2021/ 76 (1) ISSN 0869-6047 (Print) ISSN 2414-3545 (Online) Editor-in-chief: V.I. Starodubov Deputy editor-in-chief: V.V. Beregovykh Science editors: A.A. Kubanov, I.V. Maev Editorial secretary: L.S. Kokov Editorial board: V.G. Akimkin, A.I. Archakov, A.A. Baranov, Yu.V. Belov, S.A. Boytsov, N.I. Briko, A.M. Dygai, A.M. Egorov, V.L. Feigin, E.K. Ginther, P.V. Glybochko, V.M. Govorun, E.Z. Golukhova, W-D. Grimm, А. Haverih, A.A. Kamalov, A.D. Kaprin, A.V. Karaulov, S.I. Kolesnikov, R.S. Kozlov, A.A. Kubatiev, S.I. Kutsev, A.V. Lisitsa, A.D. Makatsariy, A.I. Martynov, G.A. Melnichenko, M. Müller, L.S. Namazova-Baranova, E.L. Nasonov, M.A. Piradov, N.V. Pyatigorskaya, G. Rizzo, N.S. Serdyuchenko, V.I. Sergienko, К. Shen, Y. Shoenfeld, G.T. Sukhikh, D.A. Sychev, V.A. Tutelyan, V.P. Chekhonin, M.V. Shestakova, D. Widera SCOPUS: • CiteScore 2019 — 0,8 (Q2) • SJR 2019 — 0,149 (Q4)
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ 5 20 28 43 51 67 75 86 INFECTIOUS DISEASES: CURRENT ISSUES A.B. Ryzhikov, E.A. Ryzhikov, M.P. Bogryantseva, E.D. Danilenko, I.R. Imatdinov, E.A. Nechaeva, O.V. Pyankov, O.G. Pyankova, I.M. Susloparov, O.S. Taranov, A.S. Gudymo, N.V. Danilchenko, E.S. Sleptsova, S.A. Bodnev, G.S. Onkhonova, V.N. Petrov, A.A. Moiseeva, P.Yu. Torzhkova, S.A. Pyankov, T.V. Tregubchak, D.V. Antonets, E.V. Gavrilova, R.A. Maksyutov Immunogenicity and Protectivity of the Peptide Vaccine against SARS-CoV-2 E.D. Savilov Management of the Incidence of Infectious Diseases by Applying Preventive Measures in the Weakest Period in Its Cyclicity N.I. Briko, V.A. Korshunov, K.S. Lomonosov Pneumococcal Infection in Russia: State of the Issue А.А. Kamalov, V.Yu. Mareev, Ia.A. Orlova Conceptual Approaches to Finding Effective Treatment for a New Coronavirus Infection at Different Stages E.I. Alexeeva, R.F. Tepaev, I.Y. Shilkrot, T.M. Dvoryakovskaya, A.G. Surkov, I.A. Kriulin COVID-19-Induced “Cytokine Storm” — a Unique Form of Macrophage Activation Syndrome CARDIOLOGY AND CARDIOVASCULAR SURGERY: CURRENT ISSUES E.V. Penyaeva Genetic Aspects of EbsteinAnomaly and Related Heart Diseases V.O. Bitsadze, E.V. Slukhanchuk, J.Kh. Khizroeva, M.V. Tretyakova, A.S. Shkoda, L.S. Radetskaya, A.D. Makatsariya, I. Elalamy, J.-C. Gris, E. Grandone Extracellular Neutrophil Traps (NETs) in the Pathogenesis of Thrombosis and Thromboinflammation CELL TRANSPLANTOLOGY AND TISSUE ENGINEERING: CURRENT ISSUES E.G. Gebenshchikova, D.S. Andreyuk, P.Yu. Volchkov, M.V. Vorontsova, E.K. Ginter, V.L. Izhevskaya, A.A. Lagunin, A.V. Polyakov, O.V. Popova, S.A. Smirnikhina, P.D. Tishchenko, D.Yu. Trofimov, S.I. Kutsev Human Embryo Genome Editing: An Interdisciplinary Approach СОДЕРЖАНИЕ CONTENTS АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ А.Б. Рыжиков, Е.А. Рыжиков, М.П. Богрянцева, Е.Д. Даниленко, И.Р. Иматдинов, Е.А. Нечаева, О.В. Пьянков, О.Г. Пьянкова, И.М. Суслопаров, О.С. Таранов, А.С. Гудымо, Н.В. Данильченко, Е.С. Слепцова, С.А. Боднев, Г.С. Онхонова, В.Н. Петров, А.А. Моисеева, П.Ю. Торжкова, С.А. Пьянков, Т.В. Трегубак, Д.В. Антонец, Е.В. Гаврилова, Р.А. Максютов Иммуногенные и протективые свойства пептидной вакцины против SARS-CoV-2 Е.Д. Савилов Управление инфекционной заболеваемостью на основе воздействия превентивных мероприятий на уязвимый период в циклическом развитии эпидемического процесса Н.И. Брико, В.А. Коршунов, К.С. Ломоносов Пневмококковая инфекция в Российской Федерации: состояние проблемы А.А. Камалов, В.Ю. Мареев, Я.А. Орлова Концептуальные подходы к поиску эффективного лечения новой коронавирусной инфекции на разных этапах Е.И. Алексеева, Р.Ф. Тепаев, И.Ю. Шилькрот, Т.М. Дворяковская, А.Г. Сурков, И.А. Криулин COVID-19-индуцированный «цитокиновый шторм» — особая форма синдрома активации макрофагов АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ КАРДИОЛОГИИ И СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ ХИРУРГИИ Е.В. Пеняева Генетические аспекты аномалии Эбштейна и связанных с ней заболеваний сердца В.О. Бицадзе, Е.В. Слуханчук, Д.Х. Хизроева, М.В. Третьякова, А.С. Шкода, Л.С. Радецкая, А.Д. Макацария, И. Элалами, Ж.-К. Грис, Э. Грандоне Внеклеточные ловушки нейтрофилов (NETs) в патогенезе тромбоза и тромбовоспалительных заболеваний АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ КЛЕТОЧНОЙ ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ И ТКАНЕВОЙ ИНЖЕНЕРИИ Е.Г. Гребенщикова, Д.С. Андреюк, П.Ю. Волчков, М.В. Воронцова, Е.К. Гинтер, В.Л. Ижевская, А.А. Лагунин, А.В. Поляков, О.В. Попова, С.А. Смирнихина, П.Д. Тищенко, Д.Ю. Трофимов, С.И. Куцев Редактирование генома эмбрионов человека: междисциплинарный подход
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОРГАНИЗАЦИИ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ В.О. Щепин, Л.П. Чичерин, В.И. Попов, И.Э. Есауленко Межведомственность в деле охраны здоровья детей и подростков: рекомендации ВОЗ и реалии России АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ЭНДОКРИНОЛОГИИ А.А. Поваляева, Е.А. Пигарова, А.A. Романова, Л.К. Дзеранова, А.Ю. Жуков, Л.Я. Рожинская Витамин D-связывающий белок как многофункциональный компонент сыворотки крови Ю.А. Крупинова, И.А. Воронкова, А.Р. Айнетдинова, А.Ю. Абросимов, И.В. Крюкова, С.В. Лукьянов, Ю.С. Веретенникова, Л.Х. Тевосян, Г.А. Мельниченко, Н.Г. Мокрышева Многоцентровое ретроспективное исследование клинико-лабораторных предикторов и морфологических характеристик рака околощитовидной железы ЮБИЛЕИ В.И. Стародубов Юбилей академика РАН Дедова Ивана Ивановича Поздравляем с юбилеем Шабунина Алексея Васильевича! HEALTH CARE MANAGEMENT: CURRENT ISSUES V.O. Shchepin, L.P. Chicherin, V.I. Popov, I.E. Esaulenko Interagency in Health Care Children and Adolescents: Who Recommendations and Russian Realities ENDOCRINOLOGY: CURRENT ISSUES A.A. Povaliaeva, E.A. Pigarova, A.A. Romanova, L.K. Dzeranova, A.Yu. Zhukov, L.Ya. Rozhinskaya Vitamin D-Binding Protein: Multifunctional Component of Blood Serum J.A. Krupinova, I.A. Voronkova, A.R. Ajnetdinova, A.Yu. Abrosimov, I.V. Krjukova, S.V. Lukjanov, J.S. Veretennikova, L.H. Tevosjan, G.A. Melnichenko, N.G. Mokrysheva A Retrospective Study of the Clinical and Laboratory Predictors and Morphological Characteristics of the Parathyroid Carcinoma JUBILEE V.I. Starodubov Academician of RAS Dedov Ivan Ivanovich anniversary Greet Shabunin Aleksey Vasilievich on the anniversary! 93 103 111 125 128
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ORIGINAL STUDY Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19. Обоснование Коронавирусы семейства Coronaviridae, циркулирующие в человеческой популяции и являющиеся причиной острых респираторных инфекций, периодически вызывают вспышки тяжелых инфекций, в частности тяжелого острого респираторного синдрома (возбудитель — SARS-CoV) или ближневосточного респираторного синдрома (возбудитель — MERS-CoV). Новый коронавирус SARS-CoV-2, представитель рода Betacoronavirus, по сравнению с его близкими родственниками SARSCoV и MERS-CoV способен очень быстро передаваться от человека к человеку, а летальность этого вируса превосходит смертность от вируса гриппа в 30–40 раз [1]. Пандемия, вызванная в 2019–2020 гг. вирусом SARSCoV-2, поставила перед общественным здравоохранением всех стран мира актуальную задачу — создать эффективные терапевтические и профилактические препараты. В настоящее время разрабатывается более 180 различных вакцин против новой коронавирусной инфекции, которые представляют собой субъединичные, векторные реплицирующиеся, векторные нереплицирующиеся, инактивированные, живые аттенуированные вакцины, вакцины на основе нуклеиновых кислот и вирусоподобных частиц [2]. Разработка различного типа вакцин позволит применять эти препараты или их комбинации для создания защитного иммунитета у различных целевых групп населения. Поверхностный вирусный белок S является основой большинства вакцин, разрабатываемых против нового коронавируса. Белок S вируса SARS-CoV-2 состоит из двух субъединиц. Субъединица S1 обеспечивает связывание вируса с рецептором АСЕ2, находящимся на мембране клеток-мишеней, а субъединица S2 — слияние оболочки вириона и мембраны клетки-мишени. Блокирование функций рецепторного связывания и слияния с мембраной клетки может обеспечить защиту от вирусной инфекции. Однако существует вероятность того, что использование полноразмерного S-белка SARS-CoV-2 может вызывать ряд побочных реакций, и наиболее серьезной из них может быть антителозависимое усиление инфекции, как это было ранее показано группой китайских ученых для S-белка SARS-CoV-1 [3]. Поэтому мы рассмотрели альтернативный подход к иммунизации против коронавируса, который обеспечивает формирование протективного иммунитета и исключает возможность развития антителозависимого усиления инфекции. Мы использовали технологию синтетических пептидных вакцин, которая включает этапы in silico конструирования нескольких иммуноактивных пептидных фрагментов вирусных белков, представляющих родственный вирусный антиген, этап химического синтеза DOI: https://doi.org/10.15690/vramn1572 А.Б. Рыжиков1, Е.А. Рыжиков2, М.П. Богрянцева1, Е.Д. Даниленко1, И.Р. Иматдинов1, Е.А. Нечаева1, О.В. Пьянков1, О.Г. Пьянкова1, И.М. Суслопаров1, О.С. Таранов1, А.С. Гудымо1, Н.В. Данильченко1, Е.С. Слепцова2, С.А. Боднев1, Г.С. Онхонова1, В.Н. Петров1, А.А. Моисеева1, П.Ю. Торжкова1, С.А. Пьянков1, Т.В. Трегубчак1, Д.В. Антонец1, Е.В. Гаврилова1, Р.А. Максютов1 1 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Российская Федерация 2 ООО «ЭпиВак», р.п. Кольцово, Новосибирская область, Российская Федерация Иммуногенные и протективые свойства пептидной вакцины против SARS-CoV-2 Обоснование. В 2020 г. пандемия, вызванная новой коронавирусной инфекцией, стала одним из самых серьезных испытаний для глобального здравоохранения за последнее столетие. Отсутствие вакцины как наиболее действенного способа борьбы против новой инфекции обусловило разработку научным сообществом большого количества профилактических препаратов. Нами была разработана кандидатная вакцина (ЭпиВакКорона) против новой коронавирусной инфекции SARS-CoV-2 на основе химически синтезированных пептидов, конъюгированных на белок-носитель и адсорбированных на гидроксид алюминия, и изучена ее специфическая активность. Цель исследования — изучение иммуногенных и протективных свойств кандидатной пептидной вакцины ЭпиВакКорона. Методы. Работа была выполнена при помощи стандартных молекулярно-биологических, вирусологических и гистологических методов. Результаты. Показано, что ЭпиВакКорона при двукратном введении с интервалом в 14 дней хомякам, хорькам и низшим приматам (африканским зеленым мартышкам, макакам-резусам) в дозе 260 мкг, равной одной прививочной дозе для человека, вызывает индукцию вирусспецифических антител у 100% животных. В опытах на хомяках показано, что вакцинный препарат обладает дозозависимой иммуногенностью, вакцина индуцирует ускорение элиминации вируса из верхних дыхательных путей у хорьков и предотвращает развитие пневмонии у хомяков и низших приматов после респираторного заражения новым коронавирусом. Заключение. Результаты доклинического исследования специфической активности свидетельствуют о перспективности использования ЭпиВакКорона для вакцинации людей. Ключевые слова: коронавирус, пептидная вакцина, доклинические исследования Для цитирования: Рыжиков А.Б., Рыжиков Е.А., Богрянцева М.П., Даниленко Е.Д., Иматдинов И.Р., Нечаева Е.А., Пьянков О.В., Пьянкова О.Г., Суслопаров И.М., Таранов О.С., Гудымо А.С., Данильченко Н.В., Слепцова Е.С., Боднев С.А., Онхонова Г.С., Петров В.Н., Моисеева А.А., Торжкова П.Ю., Пьянков С.А., Трегубчак Т.В., Антонец Д.В., Гаврилова Е.В., Максютов Р.А. Иммуногенные и протективые свойства пептидной вакцины против SARS-CoV-2. Вестник РАМН. 2021;76(1):5–19. doi: https://doi.org/10.15690/vramn1572
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19. A.B. Ryzhikov1, E.A. Ryzhikov2, M.P. Bogryantseva1, E.D. Danilenko1, I.R. Imatdinov1, E.A. Nechaeva1, O.V. Pyankov1, O.G. Pyankova1, I.M. Susloparov1, O.S. Taranov1, A.S. Gudymo1, N.V. Danilchenko1, E.S. Sleptsova2, S.A. Bodnev1, G.S. Onkhonova1, V.N. Petrov1, A.A. Moiseeva1, P.Yu. Torzhkova1, S.A. Pyankov1, T.V. Tregubchak1, D.V. Antonets1, E.V. Gavrilova1, R.A. Maksyutov1 1Federal Budgetary Research Institution State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”, Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Well-being, Koltsovo, Novosibirsk Region, Russian Federation 2Limited Liability Company “EpiVac”, Koltsovo, Novosibirsk Region, Russian Federation Immunogenicity and Protectivity of the Peptide Vaccine against SARS-CoV-2 Background. In 2020, the pandemic caused by novel coronavirus infection has become one of the most critical global health challenges during the past century. The lack of a vaccine, as the most effective way to control the novel infection, has prompted the development of a large number of preventive products by the scientific community. We have developed a candidate vaccine (EpiVacCorona) against novel coronavirus infection caused by SARSCoV-2 that is based on chemically synthesized peptides conjugated to a carrier protein and adsorbed on aluminum hydroxide and studied the specific activity of the developed vaccine. Aims — study of the immunogenicity and protectivity of the peptide candidate vaccine EpiVacCorona. Methods. The work was performed using standard molecular biological, virological and histological methods. Results. It was demonstrated that EpiVacCorona, when administered twice, spaced 14 days apart, to hamsters, ferrets, and non-human primates (african green monkeys, rhesus macaques) at a dose of 260 μg, which is equal to one inoculation dose for humans, induces virus-specific antibodies in 100% of the animals. Experiments in hamsters showed this vaccine to be associated with the dose-dependent immunogenicity. The vaccine was shown to accelerate the elimination of the virus from the upper respiratory tract in ferrets and prevent the development of pneumonia in hamsters and non-human primates following a respiratory challenge with novel coronavirus. Conclusions. The results of a preclinical specific activity study indicate that the use of EpiVacCorona has the potential for human vaccination. Keywords: сoronavirus, peptide vaccine, preclinical studies For citation: Ryzhikov AB, Ryzhikov EA, Bogryantseva MP, Danilenko ED, Imatdinov IR, Nechaeva EA, Pyankov OV, Pyankova OG, Susloparov IM, Taranov OS, Gudymo AS, Danilchenko NV, Sleptsova ES, Bodnev SA, Onkhonova GS, Petrov VN, Moiseeva AA, TorzhkovaPYu, Pyankov SA, Tregubchak TV, Antonets DV, Gavrilova EV, Maksyutov RA. Immunogenicity and Protectivity of the Peptide Vaccine against SARS-CoV-2. Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. doi: https://doi.org/10.15690/vramn1572 пептидных антигенов и их конъюгирование на высокомолекулярный белок-носитель. Наиболее эффективные конструкции были отобраны для включения в композицию кандидатной пептидной вакцины после изучения их иммуногенности, антигенной специфичности и протективности на животных моделях (данные не приведены). Выбор пептидов был основан на опубликованных пространственных структурах гомологичного S-белка SARSCoV-1 и данных о генетических последовательностях нового коронавируса SARS-CoV-2 [4, 5]. Эпитопы, расположенные рядом с жизненно важными для вируса участками, были сконструированы с использованием методов компьютерного моделирования. При проектировании исключены эпитопы, способные привести к антителозависимому усилению инфекции (включая пептид S597-603) или имеющие антигенное сходство с белками человека [3, 6–8]. С целью обеспечения устойчивости вакцины к возможным мутациям вируса, которые повлекут изменение антигенных свойств, выбирались эпитопы из наиболее консервативных участков белка S [7, 8]. Синтезированные пептиды были конъюгированы с белком-носителем, в качестве которого был выбран N-белок нового коронавируса, поскольку он консервативен и содержит вирусспецифические Т-клеточные эпитопы и, таким образом, также способствует формированию Т-клеток памяти. Нами была разработана синтетическая пептидная вакцина против нового коронавируса на основе химически синтезированных пептидов. Вакцина (ЭпиВакКорона) представляет собой суспензию для внутримышечного введения, содержащую композицию химически синтезированных пептидных иммуногенов S-белка коронавируса SARS-CoV-2, конъюгированных с белком-носителем и адсорбированных на гидроксиде алюминия. Ожидаемыми преимуществами такой субъединичной вакцины относительно других вакцинных платформ являются: • эффективность вакцины против антигенно изменяющихся штаммов, поскольку вакцина содержит консервативные эпитопы SARS-CoV-2; • безопасность вакцины. В отличие от большинства субъединичных, пептидная вакцина содержит лишь короткие участки вирусного белка, что дополнительно увеличивает ее безопасность и позволяет использовать для лиц с ослабленным иммунитетом, при иммунодепрессивных и иммуносупрессивных состояниях; • простота производства, стабильность компонентов дают возможность масштабировать выпуск сотен миллионов доз вакцины с использованием современных технологий твердофазного синтеза пептидов на автоматических синтезаторах; • режим хранения и транспортировки от 2 до 8 °С позволяет использовать существующие логистические процессы. Цель исследования — изучение специфических иммуногенных и протективных свойств кандидатной пептидной вакцины против SARS-CoV-2. Методы Животные В работе были использованы лабораторные животные, чувствительные к коронавирусной инфекции, такие как низшие приматы, сирийские хомяки и хорьки. Низшие приматы двух видов (Chlorocebus aethiops, 8 самцов с исходной массой тела 4,8–6,3 кг в возрасте
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19. 5–16 лет, и Macaca mulatta, 8 самцов с массой тела 3,9– 4,8 кг в возрасте 2,9–3 года) получены из питомника НИИ медицинской приматологии, г. Сочи, Россия. Сирийские хомяки, самцы и самки массой тела 0,09–0,12 кг, — из питомника ООО «КролИнфо», Россия; хорьки, самцы и самки массой тела 0,7–1,3 кг, — из питомника ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия. Продолжительность исследования Май–сентябрь 2020 г. Изучение иммуногенных свойств вакцины ЭпиВакКорона В исследовании использованы интактные, не содержащие антитела к вирусу SARS-CoV-2 хомяки, хорьки и низшие приматы. Хомяки очень чувствительны к SARS-CoV-2 и представляют собой хорошую модель для изучения данной инфекции. После интраназального заражения вирус реплицируется в верхних (ВДП) и нижних дыхательных путях и поражает легкие. Эта модель может использоваться для оценки протективных свойств вакцины, в патоморфологических и патогистологических исследованиях, в частности, может быть полезна для экспериментов по определению дозы и режима, обеспечивающих защиту от пневмонии. Две группы хомяков по 10 голов в каждой иммунизировали двукратно внутримышечно с интервалом в 14 сут двумя разными дозами вакцины ЭпиВакКорона, содержащими соответственно 86 и 260 мкг действующего вещества (0,3 и 1 вакцинирующая доза для человека соответственно). В работе использовались одноразовые трехкомпонентные шприцы объемом 1 мл с иглой 29G (ЦСКБ «Прогресс»). Третья группа получала плацебо — физиологический раствор 0,9% хлорида натрия. Хорьки менее чувствительны к SARS-CoV-2, и для развития заболевания им требуются большие дозы вируса по сравнению с хомяками. У хорьков SARS-CoV-2 реплицируется в основном в ВДП, и обычно инфекция протекает без видимых клинических проявлений. Этот факт позволяет использовать хорьков для оценки протективных свойств вакцины при интраназальном способе заражения с оценкой вирусной нагрузки в смывах из носовой полости животных в разные моменты времени после заражения. В частности, такая модель может быть использована для исследования различий в протективных свойствах различных серий вакцины. Три группы хорьков по 6 голов в каждой иммунизировали двукратно внутримышечно тремя сериями вакцины ЭпиВакКорона в дозе 260 мкг действующего вещества (1 вакцинирующая доза для человека) с интервалом 14 сут. Использовались одноразовые трехкомпонентные шприцы объемом 1 мл с иглой 29G (ЦСКБ «Прогресс»). Четвертая группа животных получала плацебо — физиологический раствор 0,9% хлорида натрия. Низшие приматы — самая близкая к человеку модель животных. Наиболее распространенными приматами, используемыми в исследованиях, являются африканские зеленые мартышки Chlorocebus aethiops и макакирезусы Macaca mulatta. Однако известно, что эти два вида различаются как по своим иммунным реакциям, так и по устойчивости к инфекциям. Поэтому нас интересовало не только изучение иммуногенных и протективных свойств вакцины ЭпиВакКорона у приматов, но и сравнение иммунных ответов и восприимчивости к коронавирусной инфекции этих двух видов [9]. Низшие приматы, по 5 голов каждого вида, иммунизировались двукратно внутримышечно вакциной ЭпиВакКорона в дозе 260 мкг действующего вещества (1 вакцинирующая доза для человека) с интервалом 14 сут. Использовались одноразовые трехкомпонентные шприцы объемом 1 мл с иглой 29G (ЦСКБ «Прогресс»). По 3 примата каждого вида получали плацебо — физиологический раствор 0,9% хлорида натрия. Через 14 и 28 дней после первой иммунизации у животных всех групп проводили забор крови и измеряли уровень антител в сыворотке против антигенов вируса SARS-CoV-2 в реакциях ИФА и вирусной нейтрализации. Изучение протективных свойств вакцины ЭпиВакКорона Все исследования по оценке протективных свойств вакцины проведены в максимально изолированной лаборатории ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора при соблюдении требований безопасной работы с микроорганизмами I–II групп патогенности. В работе использовали вирус SARS-CoV-2, штамм nCoV/Victoria/1/2020, наработанный на культуре клеток Vero E6 до титра вируса 107 фокусобразующих единиц на миллилитр (ФОЕ/мл). Хомяков и хорьков заражали интраназально дозой 102 и 103 ФОЕ соответственно через 28–30 дней после первого введения вакцины ЭпиВакКорона. За животными наблюдали в течение 14 дней после заражения, регистрируя появление клинических признаков заболевания и определяя вирусную нагрузку в смывах из носа. Приматов заражали интраназально дозой 106 ТЦД50 вируса SARSCoV-2, штамм nCov/Victoria/1/2020, через 30 дней после первого введения вакцины. За животными наблюдали в течение 14 дней после заражения, регистрируя появление клинических признаков заболевания и определяя вирусную нагрузку в мазках из носа. Определение вирусной нагрузки SARS-CoV-2 в биологических образцах на культуре клеток Смывы из носовой полости лабораторных животных использовали для приготовления 10-кратных разведений с последующим их посевом на монослой культуры клеток Vero Е6 в 96-луночных планшетах. Из лунок плоскодонного планшета с монослоем клеток удаляли ростовую среду, монослой промывали 2 раза поддерживающей питательной средой (ДМЕМ, 100 ед./мл бензилпенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 300 мкг/мл L-глютамин, 2% сыворотки крови плодов коровы). Вносили разведения исследуемых образцов, инкубировали 1 ч при температуре 37 °С в условиях 5% CO2, после чего среду из лунок удаляли и планшет 1 раз промывали поддерживающей средой. Во все лунки планшета вносили по 150 мкл поддерживающей среды. После 18–20 ч инкубации при температуре 37 °С в условиях 5% CO2 среду из лунок удаляли, добавляли по 100 мкл 80% ацетона (охлажденного до –20 °С), инкубировали в течение 10– 15 мин, удаляли ацетон и планшет промывали фосфатносолевым буферным раствором (ФСБР). Далее в каждую лунку добавляли по 100 мкл разведения моноклональных антител человека к вирусу SARS-CoV-2 (Anti-N protein SARS-CoV-2 mAb_IgG “Sanyou Biopharmaceuticals”, соотношение антител к ФСБР 1:2000). Планшет инкубировали при температуре 37 °С в течение 1 ч, после чего лунки промывали ФСБР 4 раза и вносили вторичные антитела кролика к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена (Abcam), в разведении
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ 1:1000. Через 30 мин инкубации лунки промывали 4 раза ФСБР и вносили раствор субстрата AEC (3-amino-9ethylcarbazole, Sigma). Через 30 мин инкубации раствор удаляли, планшет промывали 1 раз ФСБР, инфицированные клетки, окрашенные в красно-коричневый цвет, подсчитывали в инвертированном микроскопе, определяли титр вирусу в количестве фокусобразующих единиц на 1 мл смыва (ФОЕ/мл). Определение вирусной нагрузки SARS-CoV-2 в биологических образцах методом RT-PCR Выделение РНК из смывов из носовой полости проводили с использованием набора реагентов «Рибо-сорб» (ЦНИИЭ, Россия) согласно инструкции производителя. Синтез кДНК из выделенной РНК проводили с использованием набора реагентов для реакции обратной транскрипции «Реверта-L» (ЦНИИЭ, Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Амплификацию фрагментов кДНК вируса SARS-CoV-2, предварительно синтезированных на матрице РНК вируса SARS-CoV-2 в реакции обратной транскрипции, проводили с использованием набора реагентов «Вектор-ПЦРРВ-COVID19-RG» (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», Россия) согласно инструкции производителя. Результаты исследования интерпретировали в соответствии с инструкцией к набору. Определение вирусспецифических антител при помощи ИФА Специфические антитела были идентифицированы с использованием инактивированного вируса SARSCoV-2, штамм nCoV/Victoria/1/2020, наработанного на культуре клеток Vero E6. Иммуносорбент представляет собой 96-луночный полистирольный планшет с высокой сорбционной способностью, содержащий иммобилизованный инактивированный природный антиген SARS-CoV-2. Инактивацию природного антигена вируса проводили с использованием бета-пропиолактона путем его внесения в очищенный осаждением антиген в конечной концентрации 0,5%. Инкубацию проводили в течение 2 ч при температуре 4 °С при перемешивании, после чего прогревали в течение 2 ч при температуре 37 °С. Для титрования готовили двукратные разведения сывороток крови животных, иммунизированных вакциной, и животных контрольной группы (неиммунизированных) в интервале 1:40–1:2560. После инкубации в течение 30 мин при температуре 37 °С производили 5-кратную отмывку лунок планшета PBST c Tween-20. После завершения процедуры отмывки в лунки вносили по 100 мкл раствора конъюгата протеина А золотистого стафилококка с пероксидазой хрена в конечной концентрации 1,26 мкг/ мл («Биосан», Новосибирск). После 30-минутной инкубации при температуре 37 °С лунки промывали и вносили 0,05% раствор тетраметиленбензидина. Оптическую плотность растворов измеряли при длине волны 450 нм. Титром антител считается максимальное разведение исследуемой сыворотки, при котором оптическая плотность раствора превышает среднее значение оптической плотности отрицательного контроля. Определение вируснейтрализующих антител на культуре клеток Vero Исследуемые сыворотки перед постановкой реакции нейтрализации вируса подвергали термоинактивации при 56 °С в течение 30 мин. В стерильном круглодонном планшете готовили серийные двукратные разведе ния исследуемых сывороток на поддерживающей питательной среде (ДМЕМ, 100 ед./мл бензилпенициллина, 100 мкг/ мл стрептомицина, 300 мкг/мл L-глютамин, 2% сыворотки крови плодов коровы (Invitrogen)). В каждую лунку планшета, кроме контроля клеток, вносили вирусную суспензию, содержащую 200 ФОЕ вируса SARSCoV-2, и инкубировали 1 ч при температуре 37 °С. Далее использовали плоскодонный 96-луночный планшет с монослоем клеток Vero Е6 более 90% конфлуентности. Из лунок плоскодонного планшета с монослоем клеток Vero удаляли ростовую среду, монослой промывали 2 раза поддерживающей средой. После окончания 60-минутной инкубации из круглодонного планшета с разведениями сывороток переносили по 100 мкл в соответствующие лунки планшета с монослоем клеток. Инкубировали 1 ч при температуре 37 °С в условиях 5% CO2, после чего среду из лунок удаляли и планшет 1 раз промывали поддерживающей средой. Во все лунки планшета вносили по 150 мкл поддерживающей среды. Далее проводили процедуру окрашивания ФОЕ. После 18–20 ч инкубации при температуре 37 °С в условиях 5% CO2 среду из лунок удаляли, добавляли по 100 мкл 80% ацетона (охлажденного до –20 °С), инкубировали в течение 10–15 мин, удаляли ацетон и планшет промывали ФСБР. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл разведения моноклональных антител человека к вирусу SARS-CoV-2 (Anti-N protein SARS-CoV-2 mAb_IgG “Sanyou Biopharmaceuticals”, соотношение антител к ФСБР 1:2000). Белок N экспрессируется в гораздо больших количествах, чем S-белок, что позволяет визуализировать зараженные клетки с высокой чувствительностью антител к белку N. Планшет инкубировали при температуре 37 °С в течение 1 ч, после чего лунки промывали ФСБР 4 раза и вносили вторичные кроличьи антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (Abcam), в разведении 1:1000. Через 30 мин инкубации лунки промывали 4 раза ФСБР и вносили раствор субстрата AEC (3-amino-9-ethylcarbazole, Sigma). Через 30 мин инкубации раствор удаляли, планшет промывали 1 раз ФСБР, инфицированные клетки, окрашенные в красно-коричневый цвет, подсчитывали в инвертированном микроскопе, определяли титр вируса в количестве фокусобразующих единиц на 1 мл смыва (ФОЕ/мл). Титром нейтрализующих антител сыворотки считается разведение, при котором количество ФОЕ уменьшается на 50% по сравнению со средним значением ФОЕ в контрольных лунках. Гистологические исследования Гистологическое исследование проводили для образцов из легких хомяков и приматов через 6–7 сут после интраназального заражения коронавирусом SARSCoV-2, штамм nCoV/Victoria/1/2020. Образцы фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина для гистологических исследований («БиоВитрум», Россия) в течение 48 ч. Обработку материала проводили по общепринятой методике: последовательное обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, пропитывание в смеси ксилол–парафин и заливка в парафиновые блоки. Парафиновые срезы толщиной 4–5 мкм готовили с помощью автоматического ротационного микротома НМ-360 (Германия). Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Светооптическое исследование и микрофотосъемку проводили на микроскопе AxioImager Z1 (Zeiss, Германия) с использованием программного пакета AxioVision 4.8.2 (Zeiss, Германия). Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Рентгенологические исследования Рентгеновские снимки органов грудной полости животных получали на рентгеновском аппарате GIERTH HFX90V (Германия/Япония) с цифровой рентгенографической системой SCOPE 801CW Ultraleicht с беспроводным плоскопанельным детектором (27,4 × 35 см) CDXI-801CW и управляющим программным обеспечением CANON NE. Рентгенограммы были получены при мощности облучения 52 кВ и экспозиции 0,06 мАс/с. Рентгенографию выполняли на приматах, которым вводили внутримышечно золетил 100 (Virbac) и Xyla (Голландия) в дозах 10 мг/кг и 10 мг/животное соответственно. Этическая экспертиза Все процедуры с животными, запланированные в доклиническом исследовании, были рассмотрены и утверждены биоэтической комиссией ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (заявка ГНЦ ВБ «Вектор»/02-05.2020). Статистический анализ Анализ динамики изученных показателей внутри исследуемых групп проводился с использованием метода Фридмана и апостериорного теста Неменьи. Статистический анализ парных выборок осуществлялся с помощью теста Уилкоксона, анализ непарных выборок — с помощью теста Краскела–Уоллиса и апостериорного теста Данна. Попарные сравнения несвязанных выборок также проводились с помощью теста Манна–Уитни. Поправка на множественное тестирование во всех случаях проводилась методом Бонферрони. Частотный анализ осуществлялся с помощью точного теста Фишера (при сравнении двух групп) или с помощью теста Фишера– Фримана–Гальтона (при сравнении трех групп и более). Статистический анализ и построение графиков выполнялись с помощью специализированной программной среды для вычислений и статистического анализа R [10–12]. Результаты Дизайн вакцины Пептидная вакцина, содержащая короткие иммуногенные пептиды, конъюгированные с белком-носителем, вызывает сильные и целенаправленные иммунные ответы только на несколько В-клеточных эпитопов, которые расположены в функционально важных сайтах вирусных белков. Для создания вакцины были использованы данные рентгеноструктурного анализа белков коронавируса и информация о генетических последовательностях, кодирующих белки нового коронавируса, полученная из базы данных GISAID [4, 5]. Линейные эпитопы B-клеток в S-белке, расположенные рядом с жизненно важными для вируса сайтами, были разработаны с использованием методов компьютерного моделирования. При разработке мы исключили эпитопы, которые могут привести к антителозависимому усилению инфекции или имеют антигенное сходство с белками человека и могут вызывать иммунопатологическую реакцию [6–8]. Чтобы обеспечить устойчивость вакцины к возможным мутациям вируса, которые могли бы привести к изменению антигенных свойств, эпитопы были выбраны из наиболее консервативных областей S-белка [7, 8]. В общей сложности семь пептидов длиной 20–31 аминокислотный остаток, несущих линейные B-клеточные эпитопы S-белка, были сконструированы и химически синтезированы, а затем конъюгированы с химерным рекомбинантным белком-носителем [14]. Такие пептиды-иммуногены несут минимально необходимые антигенные детерминанты для формирования специфического иммунного ответа и содержат антигенные участки белка S нового коронавируса SARS-CoV-2, являющиеся иммуногенными для модельных животных и человека и индуцирующие протективный иммунитет против заражения коронавирусом SARS-CoV-2. Для усиления иммуногенности пептидов последние конъюгировали с белком-носителем, содержащим нуклеопротеин NP вируса SARS-CoV-2. Белок NP консервативен, не индуцирует вируснейтрализующие антитела, но содержит вирусспецифические Т-клеточные эпитопы и участвует в формировании Т-клеток памяти. NP-специфические Т-клетки детектировались у большего числа пациентов, чем для других вирусных белков, а количество NPспецифических Т-клеток, секретирующих IFN-γ, было намного выше, чем для S-RBD [13]. Эти семь активных веществ вакцин-кандидатов адсорбировали на гидроксиде алюминия. Такая синтетическая пептидная вакцина вместо многих десятков и сотен эпитопов, присутствие которых типично для обычных вакцин, содержит только несколько эпитопов, нацеленных на индукцию сфокусированного защитного иммунного ответа. Семь групп хорьков были дважды внутримышечно иммунизированы семью вакцинными кандидатами для оценки иммуногенности и защитной способности каждой конструкции против нового коронавируса (каждой группе животных вводился свой прототип вакцины). Были отобраны три наиболее иммуногенных и протективных пептидных иммуногена: RLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS, KEIDRLNEVAKNLNESLIDLQE и KNLNESLIDLQELGKYEQYIK. Пептид RLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS соответствует участку рецепторсвязывающего мотива S-белка вируса SARS-CoV-2, а два других соответствуют участку вблизи трансмембранного домена «ножки» S-белка, блокирование этого участка затрудняет слияние вирусной оболочки и клеточной мембраны. Три пептидных конъюгата, смешанные в соотношении 1:1:1 и адсорбированные на гидроксиде алюминия, представляют собой действующее начало пептидной вакцины ЭпиВакКорона (рис. 1). Иммуногенность вакцины ЭпиВакКорона На первом этапе работы изучались иммуногенные свойства вакцины ЭпиВакКорона на лабораторных животных (хомяках, хорьках, низших приматах). Всем животным препарат вводился двукратно с интервалом 14 сут между инъекциями, способ введения — внутримышечный. На рис. 2 приведены результаты исследования иммуногенности вакцины ЭпиВакКорона на хомяках и хорьках. На 14-е сут после второй иммунизации хомяков двумя разными дозами — 260 и 86 мкг — вакцина индуцирует иммунный ответ у 100% хомяков на антигены вакцины. Трехкратное уменьшение дозы вакцины приводит к дозозависимому уменьшению среднегеометрического титра (СГТ) на антигены вакцины. На 14-е сут после второй вакцинации СГТ в группе хомяков, получивших полную дозу вакцины, составляет 1:11943, в группе, получившей 1/3 дозы, — 1:6400 по отношению к антигену вакцины. При использовании цельновирионного антигена коронавируса SARS-CoV-2 СГТ составляет 1:4525 и 1:1600 для доз вакцины 260 и 86 мкг соответственно. Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Рис. 1. Схематическое изображение расположения эпитопов S-белка Источники: Использованы материалы [10], ProteinDataBase 6ACJ.pdb и CDCImageLibraryPHILID #23312. Пептид 1 Пептид 2 • Белок-носитель • Адъювант Вакцина ЭпиВакКорона S-белок Эпитопы, индуцирующие протективные антитела Эпитопы, индуцирующие антителозависимое усиление инфекции Иммунодоминантные участки Пептид 3 Рис. 2. Результаты исследования иммуногенности вакцины ЭпиВакКорона в эксприментах на хомяках и хорьках. Всем животным препарат вводился двукратно с интервалом 14 сут между инъекциями, способ введения — внутримышечный. А, Б — титры антител в сыворотке крови перед введением вакцины ЭпиВакКорона, через 14 и 28 сут после первой иммунизации: A — хомяков, Б — хорьков; В, Г — титры вируснейтрализующих антител в сыворотке крови перед введением вакцины ЭпиВакКорона, через 14 и 28 сут после первой иммунизации: В — хомяков (проводили исследование двух доз вакцин — 260 и 86 мкг), Г — хорьков (проводили исследование трех серий вакцины в дозе 260 мкг) Хомяки Дней после 1й иммунизации Доза вакцинации, мкг/мл Серия вакцины Дней после 1й иммунизации 0 0 placebo placebo 86 К01 К02 К03 260 0 0 4,5 80 80 60 60 40 40 20 20 4,5 4,0 4,0 3,5 3,5 3,0 3,0 2,5 2,5 2,0 2,0 14 14 14 14 28 28 28 28 Обратный титр АТ против АГ ЭВК, log10 Вируснейтрализующий обратный титр Хорьки А В Б Г Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ После иммунизации хорьков тремя сериями вакцины ЭпиВакКорона в дозе 260 мкг у 17 из 18 (94%) животных наблюдается появление специфических антител с титром от 1:800 до 1:6400 на 14-е сут после первой вакцинации. Через 14 сут после второй вакцинации у 100% хорьков формируется высокий уровень специфических антител и СГТ в трех группах хорьков, иммунизированных тремя сериями вакцины ЭпиВакКорона, и составляет 1:9051–1:10159 (см. рис. 2). Показано, что вакцина ЭпиВакКорона индуцирует антитела в высоких титрах у 100% приматов к антигенам вакцины и цельновирионному антигену коронавируса SARS-CoV-2 на 14-е сут после второй вакцинации (рис. 3). У зеленых мартышек СГТ составляет 1:11143 к антигену вакцины и 1:10159 — к цельновирионному антигену коронавируса SARS-CoV-2, тогда как у макак-резусов в эти сроки СГТ к антигену вакцины составляет 1:12800, а к цельновирионному антигену коронавируса SARSCoV-2 — 1:7352. У 100% зеленых мартышек обнаружены нейтрализующие антитела в титре 1:40 на 14-е сут после первой вакцинации. Протективность вакцины ЭпиВакКорона На 14-е сут после второй вакцинации всех иммунизированных животных интраназально заражали новым коронавирусом SARS-CoV-2 в дозе 102 ФОЕ для хомяков, 103 ФОЕ — для хорьков и 106 ТЦД50 — для приматов. Хомяков на 6-е и 14-е сут после заражения подвергали эвтаназии, измеряли индекс массы легкие/тело и проводили гистологическое исследование легких. На 6-е сут после заражения индекс массы легкие/тело в группе плацебо (0,0108 ± 0,0004 — средняя величина и стандартная ошибка) статистически значимо отличается от индекса в группах вакцинированных ЭпиВакКорона (для дозы 260 мкг — 0,0080 ± 0,0023, для дозы 86 мкг — 0,0086 ± 0,0008) (рис. 4). При гистологическом исследовании срезов легких тяжелые патологические изменения наблюдались в группе плацебо хомяков, где обнаруживались полная потеря эпителиальной выстилки мелких бронхов и бронхиол, очаги некротизации, плазматическое пропитывание стенок сосудов, значительные по площади зоны ателектаза. У животных, вакцинированных максимальной дозой 260 мкг вакцины ЭпиВакКорона, наблюдались только Рис. 3. Гуморальный иммунный ответ на антигены коронавируса у вакцинированных ЭпиВакКорона зеленых мартышек и макакрезусов. Всем животным группы ЭпиВакКорона препарат вводился двукратно внутримышечно в дозе 260 мкг с интервалом 14 сут между инъекциями. А, Б — титры антител в сыворотке крови приматов к антигену вакцины ЭпиВакКорона через 14, 21 и 28 дней после первой иммунизации: А — Chlorocebus aethiops, Б — Macaca mulatta; В, Г — титры антител в сыворотке крови приматов к антигенам инактивированного коронавируса SARS-CoV-2 через 14, 21 и 28 дней после первой иммунизации: В — Chlorocebus aethiops, Г — Macaca mulatta А В Б Г Chlorocebus aethiops Macaca mulatta Обратный титр АТ против АГ ЭВК, log10 Обратный титр АТ против SARS-CoV-2, log10 Дней после 1й иммунизации Дней после 1й иммунизации Группа placebo ЭпиВакКорона 14 14 14 14 21 21 21 21 28 28 28 28 4,5 4,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 4,5 4,0 3,5 4,0 3,5 3,0 3,5 3,0 2,5 3,0 2,5 2,0 2,5 2,0 2,0 Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.
The article is licensed by CC BY-NC-ND 4.0 International Licensee https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ORIGINAL STUDY НАУЧНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ локальные явления отека и воспалительно-клеточной инфильтрации, на малых участках легочной паренхимы отмечались дистрофические изменения эпителия мелких бронхов и кровеносных сосудов микроциркуляторного русла (рис. 5). Для хорьков показано, что на 6-е сут после заражения более чем в 100 раз снижается нагрузка по вирусной РНК в группах вакцинированных животных по сравнению с группой плацебо. Коронавирус из носовых смывов детектируется у 6 (33%) из 18 вакцинированных хорьков и у 100% животных в группе плацебо. На 8-е сут после заражения вирусная РНК выделяется в носовом смыве у 11% вакцинированных хорьков и 67% животных в группе плацебо, при этом на культуре клеток вирус высевается Рис. 4. Протективность вакцины ЭпиВакКорона на хомяках и хорьках после заражения коронавирусом. Всем животным препарат вводился двукратно внутримышечно с интервалом 14 сут между инъекциями. A, Б — вирусная нагрузка, измеренная по значению порогового цикла Ct, в носовом смыве на 2-, 4-, 6-, 8- и 10-й дни после интраназального заражения коронавирусом: А — хомяков (проводили исследование двух доз вакцины — 260 и 86 мкг), Б — хорьков (проводили исследование трех серий вакцины в дозе 260 мкг); В, Г — вирусная нагрузка, измеренная по количеству инфекционных центров ФОЕ, в носовом смыве на 2-, 4-, 6-, 8- и 10-й дни после интраназального заражения коронавирусом: В — хомяков (проводили исследование двух доз вакцины — 260 и 86 мкг), Г — хорьков (проводили исследование трех серий вакцины в дозе 260 мкг); Д, Е — индекс отношения массы легкие/ тело, измеренный на 6-е и 14-е сут после интраназального заражения коронавирусом: Д — хомяков (проводили исследование двух доз вакцины — 260 и 86 мкг), Е — хорьков (проводили исследование трех серий вакцины в дозе 260 мкг) у 50% животных из группы плацебо и 11% вакцинированных животных. Время элиминации вируса из ВДП вакцинированных хорьков сокращается более чем на 6 сут в сравнении с группой плацебо (см. рис. 4). Для приматов показано, что на 2-, 4-, 6-, 8-, 10- и 12-е сут после заражения статистически значимых отличий в вирусной нагрузке в мазках из носа для вакцинированных и групп плацебо внутри каждого из двух видов не зарегистрировано. Скорость элиминации коронавируса с поверхности слизистой носа у зеленых мартышек была больше, чем у макак-резусов, как для вакцинированных, так и в группах плацебо. Масса тела приматов после заражения вакцинированных и групп плацебо значимо не изменялась. Однако у приматов каждого вида, Хомяки Хорьки А В Д Б Г Е 2 2 2 4 6 14 14 6 8 4 6 2 4 4 6 6 8 8 10 10 25 6 4 0,015 0,010 0,008 0,006 0,013 0,011 0,009 0,007 3 2 1 0 4 0 2 40 30 20 20 15 10 Вирусная нагрузка, Ct Вирусная нагрузка, log10 ФОЕ Индекс массы легких Дней после заражения Дней после заражения Доза вакцинации, мкг/мл Серия вакцины placebo placebo 86 К01 К02 К03 260 Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2021;76(1):5–19. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.