Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные, 2011, № 1

ISSN 5181501959

сельскохозяйственные
животные

1

2011
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ
ÂÅÒÅÐÈÍÀÐÍÛÉ
ÆÓÐÍÀË

Ветеринарное образование

Микробиология

Вирусология

Биотехника размножения

Кормление

Генетика

Эпизоотология

Паразитология

Лабораторная диагностика

Ветеринарное законодательство

Фармакология

Óâàæàåìûå ÷èòàòåëè!
Èçäàòåëüñêèé äîì «Ëîãîñ Ïðåññ» ñîîáùàåò î âîçîáíîâëåíèè âûïóñêà èçäàíèÿ «Ðîññèéñêèé âåòåðèíàðíûé æóðíàë. Ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûå æèâîòíûå».
«Ðîññèéñêèé âåòåðèíàðíûé æóðíàë» — íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêîå èçäàíèå äëÿ ñïåöèàëèñòîâ â
îáëàñòè âåòåðèíàðíîé ìåäèöèíû è áèîòåõíîëîãèè.
Ãëàâíûé ðåäàêòîð èçäàíèÿ — ðåêòîð Ìîñêîâñêîé ãîñóäàðñòâåííîé àêàäåìèè âåòåðèíàðíîé
ìåäèöèíû è áèîòåõíîëîãèè èìåíè Ê.È. Ñêðÿáèíà, çàñëóæåííûé ðàáîòíèê âûñøåé øêîëû,
äîêòîð âåòåðèíàðíûõ íàóê, àêàäåìèê ÐÀÑÕÍ Ô.È. Âàñèëåâè÷.
«Ðîññèéñêèé âåòåðèíàðíûé æóðíàë. Ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûå æèâîòíûå» èçäàåòñÿ ïðè èíôîðìàöèîííîé ïîääåðæêå Äåïàðòàìåíòà âåòåðèíàðèè Ìèíèñòåðñòâà ñåëüñêîãî õîçÿéñòâà Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè è Ôåäåðàëüíîé ñëóæáû ïî âåòåðèíàðíîìó è ôèòîñàíèòàðíîìó íàäçîðó
(Ðîññåëüõîçíàäçîð).
«Ðîññèéñêèé âåòåðèíàðíûé æóðíàë» âõîäèò â Ïåðå÷åíü ÂÀÊ âåäóùèõ ðåöåíçèðóåìûõ íàó÷íûõ æóðíàëîâ è èçäàíèé, â êîòîðûõ äîëæíû áûòü îïóáëèêîâàíû îñíîâíûå ðåçóëüòàòû
äèññåðòàöèé íà ñîèñêàíèå ó÷åíîé ñòåïåíè äîêòîðà è êàíäèäàòà íàóê ïî íàïðàâëåíèÿì âåòåðèíàðèÿ, çîîòåõíèÿ, áèîëîãè÷åñêèå íàóêè.
Ñîäåðæàíèå êàæäîãî íîìåðà îõâàòûâàåò âñå îáëàñòè äåÿòåëüíîñòè âåòåðèíàðíûõ ñïåöèàëèñòîâ — ïðîôèëàêòèêà, äèôôåðåíöèàëüíàÿ äèàãíîñòèêà, ëå÷åíèå ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé, ðàöèîíàëüíîå êîðìëåíèå, ñîäåðæàíèå è âîñïðîèçâîäñòâî æèâîòíûõ.
Íà ñòðàíèöàõ æóðíàëà ÷èòàòåëè íàéäóò àêòóàëüíóþ èíôîðìàöèþ îá ýïèçîîòè÷åñêîé ñèòóàöèè â ñòðàíå, îò÷åòû Ìèíñåëüõîçà ÐÔ, Âñåìèðíîé îðãàíèçàöèè îõðàíû çäîðîâüÿ
æèâîòíûõ (ÌÝÁ), ñòàòüè âåäóùèõ îòå÷åñòâåííûõ è çàðóáåæíûõ àâòîðîâ. Ìàòåðèàëû, ïóáëèêóåìûå â æóðíàëå, èìåþò ïðàêòè÷åñêóþ çíà÷èìîñòü è íåîáõîäèìû â ïîâñåäíåâíîé
äåÿòåëüíîñòè âåòåðèíàðíîãî ñïåöèàëèñòà.
Àâòîðèòåòíûé êîëëåêòèâ ó÷åíûõ, îñóùåñòâëÿþùèõ ðåöåíçèðîâàíèå ðóêîïèñåé, ãàðàíòèðóåò îáúåêòèâíîñòü è äîêàçàòåëüíîñòü ðàçìåùàåìûõ ìàòåðèàëîâ, îáåñïå÷èâàÿ âûñîêèé íàó÷íûé óðîâåíü èçäàíèÿ êàê îáúåêòèâíîãî èñòî÷íèêà ïðîôåññèîíàëüíîé èíôîðìàöèè.
Ðåäàêöèÿ æóðíàëà ïðèãëàøàåò ê ñîòðóäíè÷åñòâó âñåõ çàèíòåðåñîâàííûõ ëèö — íàó÷íûõ
ñîòðóäíèêîâ, àñïèðàíòîâ, ðàáîòíèêîâ âûñøåé øêîëû, ïðàêòèêóþùèõ âðà÷åé — äëÿ ïóáëèêàöèè ðåçóëüòàòîâ ñâîèõ èññëåäîâàíèé, êëèíè÷åñêèõ ñëó÷àåâ, îáñóæäåíèÿ íàèáîëåå îñòðûõ âîïðîñîâ, êàñàþùèõñÿ ýïèäåìèîëîãè÷åñêîãî áëàãîïîëó÷èÿ è ïðîäîâîëüñòâåííîé áåçîïàñíîñòè ñòðàíû.

Èçäàòåëüñêèé äîì «Ëîãîñ Ïðåññ»

РВЖ • СХЖ • № 1/2011

3

Общие правила для авторов

Правила составлены с учетом Единых требований
к рукописям, представляемым в биомедицинские журналы.
В РВЖ публикуются актуальные проблемные и оригинальные статьи, лекции, обзоры, краткие сообщения, письма в редакцию. Все материалы рецензируются редакционной коллегией и в случае положительного
заключения передаются для предпечатной подготовки. Редколлегия оставляет за собой право сокращать
и редактировать статьи и берет на себя обязанность
согласовывать окончательный вариант публикации с
автором.
Объем оригинальных статей не должен превышать
10 машинописных страниц, напечатанных 14-м шрифтом через 2 интервала, обзоров и лекций — 15, кратких сообщений — 4 страниц.
Обязательные элементы рукописи — заголовок,
ФИО авторов с указанием их места работы или учреждения, в котором работа выполнялась, ключевые
слова (от 3 до 10), библиография, резюме на английском
языке (не более 500 знаков).
Требования к структуре оригинальной статьи введение, цель исследования, материалы и методы, результаты, обсуждение, таблицы, иллюстрации, подписи к рисункам. Число таблиц не должно превышать
4, число иллюстраций не ограничено. Библиография
оригинальных статей и кратких сообщений должна

содержать до 10 источников литературы (не следует включать ссылки на учебные пособия), обзоров —
не менее 30.
Иллюстрационный материал должен быть связан с
темой статьи. Рисунки (схемы) должны быть четкими. В статье не следует использовать иллюстрации,
взятые из Интернета. 
Иллюстрации желательно предоставлять в виде
отдельных файлов в одном из стандартных векторных или растровых форматов: tiff, eps, cdr и ai (шрифты, использующиеся в этих иллюстрациях, должны
быть переведены в кривые), psd, и т.п., с разрешением рисунков не менее 600 dpi, а фотографий — с разрешением 300 dpi. Допускается оформление рисунков
в виде объектов Microsoft Excel и Microsoft Visio. Рисунки и схемы, выполненные средствами редактора Word,
должны быть сгруппированы внутри единого объекта. 

Авторам необходимо также приложить контактную информацию (номера телефонов, почтовый адрес и e-mail), а также заверенное подписями письменное подтверждение того, что переданные в РВЖ материалы (включая иллюстрации) ранее нигде не публиковались. Отдельно нужно указать, согласны ли
авторы на перепечатку своей статьи информационными партнерами РВЖ без выплаты дополнительного гонорара.

Главный редактор
Ф.И. Василевич

Выпускающий 
редактор
В.В. Ракитская

Редакционная 
коллегия
Акбаев М.Ш.
Андреева Н.Л.
Архипов И.А.
Балакирев Н.А.
Белова Л.М.
Бессарабов Б.Ф.

Власов Н.А.
Грищенко Л.И.
Данилевская Н.В.
Жаров А.В.
Кузнецов А.И.
Максимов В.И.
Пронин А.В.
Санин А.В.
Сидорчук А.А.
Сноз Г.В.
Сотникова Л.Ф.
Стекольников А.А.
Федоров Ю.Н.
Шустрова М.В.
Щербаков Н.П.

Воспроизведение материалов в любом виде, 
включая электронный, возможна только по письменному 
согласованию с издательством
Редакция не несет ответственности 
за содержание рекламных материалов
Рукописи, принятые на рассмотрение, 
редакция не возвращает

Научнопрактический журнал
Издается с марта 2005 г.

«Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные» входит в Перечень ВАК ведущих
рецензируемых научных журналов и изданий, в которых
должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора 
и кандидата наук (по зоотехническим и ветеринарным
специальностям, по биологическим наукам)

Учредитель: Издательский дом «Логос Пресс»
Директор М.В. Быльков 
Руководитель проекта И.М. Шугурова, к.б.н.
Руководитель отдела маркетинга Е.В. Лебедева
Дизайн и верстка Я.В. Быстрова

Адрес редакции: 127055, Москва, а/я 9
Email: rvj@logospress.ru, info@logospress.ru
Сайт: http://logospress.ru
Тел.: +7/495/2204816, факс: +7/495/6890575

Свидетельство о регистрации СМИ:
ПИ № ФС7746191 от 12.08.2011

Тираж: 3000 экз.

Оформление подписки
каталог «Почта россии» — 12594 (на первое полугодие 2012 г.)

Журнал выпускается при участии:
Учебнометодического объединения высших учебных заведений 
Российской Федерации по образованию 
в области зоотехники и ветеринарии

Федеральной службы по ветеринарному 
и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор)

Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ

РВЖ • МДЖ • № 1/2011

5

Содержание/Content

Ðîññèéñêèé 
Âåòåðèíàðíûé 
Æóðíàë
Russian Veterinary Journal
1/2011

Актуальная тема

К новому учебному году

Василевич Ф.И. 
Ветеринарных врачей должны готовить качественно . . . . . . 6

Оригинальные статьи

Микробиология

Коваленко А.М., Сноз Г.В., Сапегин В.М., 
Жабина В.Ю., Аничин Р.Ю. 
Изучение белков культуральных 
фильтратов микобактерий . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Вирусология

Юров Г.К., Сайдарова М.М., 
Алексеенкова С.В., Амирбеков М., Юров К.П. 
Ретроспективная иммуноферментная 
диагностика гриппа птиц H5N1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

Биотехника размножения

Аксенова П.В. 
Сравнительная характеристика различных способов
криоконсервации спермы козла . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

Кормление

Габитова З.С, Мамцев А.Н., Ибрагимов В.Р., 
Байматов В.Н., Динякова М.В., Козлов В.Н.
Биохимические показатели крови свиней 
при введении в рацион БАД «Йодпектин» 
и аминокислоты лизин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Генетика

Ольховская Л.В., Криворучко С.В., 
Целовальникова М.И. 
Выявление степени генетического родства карачаевской,
тувинской и арабской пород лошадей . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

Эпизоотология

Масленникова В.И., Голева Т.П. 
Эпизоотологический мониторинг основных заразных
болезней пчел на пасеках тепличных хозяйств 
Московской области . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

Паразитология

Данилевская Н.В., Бессарабова Е.В. 
Влияние различных схем лечения 
на морфометрические показатели растущих кур 
при экспериментальном кокцидиозе . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

Лабораторная диагностика

Заблоцкий В.Т., Белименко В.В. 
Криогенное консервирование возбудителей
кровепаразитарных болезней животных . . . . . . . . . . . . . . . 27

Эпизоотическая ситуация . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Ветеринарное законодательство . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Обзоры

Санин А.В., Наровлянский А.Н., Пронин А.В. 
Иммуномодуляторы в сельском хозяйстве — 
дань моде или необходимость . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

Vital topic

Anticipating the new academic year

Vasilevich F.I. 
Veterinary surgeons of high grade should be trained carefully . . . 6

Original articles

Microbiology

Kovalenko A.M., Snoz G.V., Sapegin V.M., 
Zhabina V.J., Anichin R.J. 
Study of proteins isolated from 
Mycobacterium . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Virology

Yurov G.K., Saidarova M.M., 
Alexeyenkova S.V., Amirbekov M., Yurov K.P. 
Retrospective diagnostic of avian influenza 
H5N1 by ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

Reproduction biotechnology

Aksenova P.V. 
Comparative description of various buck 
semen cryopreservation methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

Feeding

Gabitova Z.S., Mamtsev A.N., Ibragimov V.R., 
Baymatov V.N., Dinyakova M.V., Kozlov V.N. 
Biochemical parameters of pig blood following 
introduction of iodine supplements «Iodpectin» 
and amino acids lysine into the diet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Genetics

Olkhovskaya L.V., Krivoruchko S.V., 
Tselovalnikova M.I. 
Study of genetic kinship degree between carachayevskaya, 
local touvinskaya and arabic horses . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

Epizootology

Maslennikova V.I., Goleva T.P. 
Epizootic monitoring of main contagious 
bee diseases in the apiaries of Moscow region 
greenhouse farms . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

Parasitology

Danilevskaya N.V., Bessarabova E.V. 
Влияние различных схем лечения 
на морфометрические показатели растущих кур 
при экспериментальном кокцидиозе . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

Laboratory diagnostics

Zablotskiy V.T., Belimenko W.V. 
Cryogenic preservation 
of animal blood parasites . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

Epizootic situation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Veterinary legislation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Reviews

Sanin A.V., Narovlyansky A.N., Pronin A.V. 
Immunomodulators usage in agriculture —
fad or necessity . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

АКТУАЛЬНАЯ ТЕМА

6

Ветеринарный врач — одна из самых сложных врачебных профессий: его пациентов лечить гораздо труднее, чем людей. Поэтому ветврачом должен быть специалист с огромным багажом знаний по всем разделам ветеринарии. Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени
К.И. Скрябина, ведущая подготовку таких специалистов,
уделяет огромное внимание качеству образования, которое отвечало бы запросам потребителя. 
Качество ветеринарного образования включает в себя
ряд важнейших аспектов.
Во-первых, это подготовка выпускников школ. Уровень
школьного образования отражается на всем последующем процессе обучения и никакие инновации учебного
процесса не принесут пользы, если студент не готов их
воспринять.
Чтобы исправить ситуацию, мы проводим олимпиады
среди учеников 42 профессиональных колледжей и по
их результатам (а не по результатам ЕГЭ), набираем ребят,
занимающих призовые места. В 2011 г. факультет ветеринарной медицины пополнился 79 такими победителями. Кроме того, в академии успешно работают трех-, шести-, восьмимесячные и двухгодичные подготовительные
курсы. В текущем году курсы закончили 195 школьников, из них в академию поступили 138 (70,8 %).
Вторая составляющая — качество передачи знаний.
Сегодня кадровый потенциал академии позволяет готовить квалифицированных, отвечающих современным
требованиям специалистов. Академия — единственный
вуз данного профиля, в котором среди штатных преподавателей 9 академиков, 5 членов-корреспондентов государственных академий наук, 96 докторов наук и профессоров.
Начали приходить к нам и молодые преподаватели.
Мы стараемся поддерживать их материально и посылать на стажировки. Это позволяет решать самое сложное
в подготовке ветеринарного врача — учить искусству
врачевания. Чему также способствует достаточная клиническая база: анатомический театр, коллекция макрои микропрепаратов, виварий, современная ветеринарная
клиника, учебно-опытное хозяйство и др.
На факультете ветеринарной медицины работает 19
кафедр. Мы организовали в вузе хорошо оборудованную кафедру иммунологии и нанотехнологии: она популярна у студентов. Восемь лет назад открылась кафедра биотехнологии, эффективно работает кафедра
«Биология и патология мелких домашних, лабораторных
и экзотических животных». Считаю, что сокращение
специализированных кафедр в ветеринарных вузах,
которое мы наблюдаем в настоящее время, — опасная тенденция, влияющая на качество профессиональной подготовки ветврачей. В 2011 г. состоялся первый
выпуск ветеринарно-санитарных экспертов — в городе эта специальность очень востребована. Из новых

специальностей могу также назвать биоэкологию, биотехнологию и кинологию. Планируем начать подготовку специалистов для государственной службы.
Для этого требуется третья составляющая качества
обучения — материально-техническая база, нуждающаяся в серьезных вложениях. Чтобы вести подготовку конкурентных на рынке труда ветеринарных врачей,
в 2012 г. нам потребуется около 150 млн рублей. Конечно, на такое бюджетное финансирование мы не
рассчитываем, поэтому решаем проблему за счет внебюджетных вливаний в учебный процесс, которые
направляем на приобретение современного и технологичного оборудования. Мы располагаем современным оборудованием для артроскопии, эндоскопии,
стоматологии, офтальмологии, ультразвуковой диагностики и др. Однако этого недостаточно. И для решения проблемы мы организовали филиалы кафедр
в городских ветеринарных центрах, клиниках и НИИ,
где наши преподаватели проводят выездные занятия
со студентами.
Еще одна учебная площадка — рынки Москвы. Здесь
ведется строгий контроль качества продукции с помощью самой современной техники.
Есть у нас филиалы кафедр в передовых сельскохозяйственных предприятиях и крупных агрохолдингах.
Для улучшения качества подготовки выпускников
на базе академии в прошлом году была создана Ассоциация образовательных и научно-исследовательских учреждений, которая называется «Ветеринария,
зоотехния и биотехнология». Учредителями стали
МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт
птицеводства и Всероссийский институт эксперимен
Ветеринарных врачей 
должны готовить качественно

Ф.И. Василевич, ректор ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины 
и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Ректор МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, заслуженный работник
высшей школы, доктор ветеринарных наук, академик РАСХН,
профессор Федор Иванович Василевич

К НОВОМУ УЧЕБНОМУ ГОДУ

Ветеринарных врачей должны готовить качественно

РВЖ • СХЖ • № 1/2011

7

тальной ветеринарии им.Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии. В ассоциацию вошли представители среднего, средне-специального, высшего и дополнительно-профессионального образования, вузы, НИИ и предприятия по производству и переработке сельхозпродукции.
Тут налицо единая система подготовки, ее непрерывность, взаимодействие науки, образования, производства и переподготовки кадров. Сейчас практикуем образование филиалов кафедр в НИИ и производственных
хозяйствах различного типа, что позволяет значительно усилить качество профессиональной подготовки специалистов.
Один из главных показателей работы аграрного вуза — трудоустройство выпускников.
В этом году мы обратились в 25 регионов, ответы
пришли из 15, и выяснилось, что потребность в специалистах очень высокая. Это ярко показала и ярмарка вакансий, проводимая в академии. Выпускники академии готовы пойти в продуктивное животноводство,
если будет в полной мере реализована федеральная целевая программа развития села. Конечно, большую
конкуренцию в этом вопросе составляют ветеринарные клиники в городах, крупные холдинги, где зарплата значительно выше, чем в колхозах и совхозах.
С 2011 г. подготовка ветеринарных врачей будет
осуществляться по новым государственным образовательным стандартам. По ветеринарии остается многоуровневая система подготовки, специалитет со сроком обучения 5 лет. По ветеринарно-санитарной экспертизе вводится трехступенчатая сетка: это бакалавр,
магистр, доктор. Основное преимущество и отличие
нового федерального образовательного стандарта по
ветеринарии заключается в том, что он направлен на
радикальное преобразование образовательных программ за счет их перевода на компетентный формат
и усиление их адаптации к текущим потребностям
рынка образовательных услуг.
Много специалистов участвовало в разработке нового образовательного стандарта. В нем предусмотрены и общекультурные, профессиональные компетенции выпускника в различных областях деятельности.
Общая трудоемкость общеобразовательной программы будет выражаться в зачетных единицах. Нормативный срок освоения программы — пять лет, это 300
зачетных единиц.
Что же здесь изменилось? С этого года отменяется
заочная форма обучения. Значительно сокращен гуманитарный социально-экономический цикл, в прошлом
стандарте он был перегружен. Сокращены общематематические и естественно-научные дисциплины и значительно усилен ветеринарно-биологический цикл.
Профессиональный цикл увеличен до 115 зачетных
единиц. Каждый цикл имеет базовую обязательную
часть и вариативную, которую определяет сам вуз. Вузы
самостоятельно разрабатывают и утверждают образовательные программы, причем наука является обязательным разделом основной образовательной программы подготовки специалистов.
Мы не считаем, что закостенели в своих прошлых понятиях. Открываем новые дисциплины. Практикуем

выезды студентов для обучения за рубеж. Предоставляем им возможность для научной работы. И преподаватели наши, молодые или пожилые, являют собой образец преданности своему делу, вкладывают много души
и доброты в отношения со студентами.
Конечно, проблем в ветеринарном образовании много, их нужно решать в комплексе. Давно назрела необходимость разработки единой кадровой политики
ветеринарной службы РФ. В концепции необходимо
четко изложить цели и задачи ветеринарной службы,
науки и образования на современном этапе.
Существует необходимость введения непрерывной
системы обучения в области ветеринарии. Нужно вложить в законодательные основы задачи послевузовского ветеринарного образования и постоянного повышения квалификации ветеринарного специалиста.
В 2011 г. по решению национального центра общественно-профессиональные аккредитации (нацаккредитцентр) образовательные программы «Ветеринария», «Ветсанэкспертиза» и «Биохимия» вошли в число победителей среди образовательных программ, получивших широкое признание академического и
профессионального сообщества РФ.
В этом году академии выдан Сертификат на Национальный Знак Качества серии 77 № 100, подтверждающий включение академии в реестр вузов,
которым дано право использовать логотип «Национальный Знак Качества». В рейтинге вузов по качеству зачисленных студентов на первый курс государственных вузов на очную форму обучения академия
заняла первое место среди 59 сельскохозяйственных
вузов страны.
Коллеги по профессии знают, что Всемирная организация по охране здоровья животных и Комиссия
европейского союза объявили 2011 год Всемирным годом ветеринарного образования и ветеринарной профессии. В 2010 г. в Париже состоялась Всемирная конференция по ветеринарному образованию, на которой
главное внимание было уделено вопросам здоровья человека через здоровье животных и благополучию окружающей среды.
13—15 мая 2011 г. в ветеринарной школе в г. Лионе
(Франция) состоялась Всемирная конференция по ветеринарному образованию. Как подчеркнул Бернард Вале, генеральный директор Всемирной организации по
охране здоровья животных, «Всемирный год ветеринарии — прекрасная возможность отметить работу ветеринаров на общее благо и их вклад в развитие гражданского общества».
31 августа, день памяти святых мучеников Флора и
Павла, объявлен церковным праздником ветеринаров. 
Ветеринар — это замечательная профессия. Эти люди
спасают и лечат братьев наших меньших, которые для
многих не просто животные, а члены семьи. 

От всей души поздравляю всех студентов с началом учебного года и Днем знаний, праздником молодых россиян, которые, овладев новыми знаниями,
будут творить будущее нашей Родины. Потому что,
Знание — сила!

Изучение белков культуральных
фильтратов микобактерий

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

8

А.М. Коваленко1, Г.В. Сноз2, В.М. Сапегин1, В.Ю. Жабина1, Р.Ю. Аничин1 

1 ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».

2 ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени 
К.И. Скрябина».

Ключевые слова: белки культурального фильтрата,
культуральный фильтрат, микобактерии, туберкулез
Сокращения: КФ — культуральные фильтраты

Введение

Туберкулез (от лат. tuberculum — бугорок) — широко распространенное во всем мире зооантропонозное заболевание, вызываемое различными видами
микобактерий. Группа микобактерий туберкулеза,
способных вызывать эту инфекцию у человека и животных, включает в себя M. tuberculosis, M. bovis,
M. africanum, M. canettii, M. microti, M. pinnipedii
и M. caprae.
Белки (туберкулопротеиды) являются главными носителями антигенных свойств микобактерий туберкулеза и проявляют специфичность в реакциях повышенной чувствительности замедленного типа. К указанным белкам относят туберкулин. С полисахаридами связано обнаружение антител в сыворотке крови
больных туберкулезом. Липидные фракции способствуют устойчивости микобактерий к кислотам и щелочам.
Антигенный состав возбудителей туберкулеза достаточно постоянен и его вариации в пределах вида
незначительны. Обнаружено более 100 индивидуальных антигенов, однако, лишь 20…25 играют роль в
иммунном ответе [3].
M. bovis и M. tuberculosis имеют 90…95 % антигенного родства, в свою очередь с M. avium у указанных видов оно не превышает 70…80 % и их можно
четко дифференцировать по антигенному составу в
серологических тестах [9].
Специалисты разных стран более 20 лет изучали белковые КФ, полученные культивацией M. bovis
in vitro, для иммунологической идентификации
и характеристики белков [3, 4, 13, 22]. Изготовление вакцин на основе белков КФ, секретируемых
микобактериями туберкулеза, в связи с их более
высокой иммуногенностью представлялось более
перспективным, чем изготовление инактивированных вакцин [2]. Готовились взвеси КФ для стимулирования защитного иммунного ответа у некоторых
линий мышей и морских свинок [6, 18, 22, 23]. Выделение и оценка антигенов КФ была предметом
интенсивных исследований различных научных лабораторий [5, 12, 13]. Результатом этой работы стало увеличение количества новых антигенов, таких
как MPT59 [7, 17, 20], ESAT-6 [27], MPT64 [21],
MTB12 [28], MTB8.4 [11], CFP29 [12], TB10.4 [26],
TB9 [10] и др.

Широко обсуждалась природа внеклеточных белков из КФ, и белков, в которых предполагали наличие сигнальных последовательностей и присутствующих в КФ в больших количествах, например, MPT59,
MPT44 , MPT45, MPT64, MPT51, MPT32, MPT53 [14,
30]. Белки, которые, очевидно, транспортируются другими механизмами, были также обнаружены в КФ,
как описано для супероксиддисмутазы и глутаминсинтетазы [15, 16].
В дополнение к «подлинным» внеклеточным компонентам, такие белки, как PstS (38 кДа) и липопротеин (19 кДа), медленно высвобождаются из клеточной оболочки в культуральную среду [8]. Некоторые белки, локализация которых ожидалась внутри
клетки, такие как GroES и рибосомальный белок
L7/L12, также обнаружены в КФ [7…18]. Это свидетельствует о том, что культуры M. bovis BCG [29]
проявляют стойкость к аутолизу, а их КФ неизбежно содержит некоторые цитоплазматические компоненты.
Нами проведены исследования всего набора
белков КФ с различным состоянием культур клеток, выращенных на синтетических питательных
средах.

Цель исследования

Изучить белковый состав КФ микобактерий
туберкулеза, выращенных с различным накоплением бактериальной массы на питательных
средах.

Материалы и методы

Для наработки бактериальной массы использовали
жидкие синтетические питательные среды для выращивания микобактерий туберкулеза (среды Павловского и Сотона).
Суспензии культуральных фильтратов и ультразвуковых дезинтегратов фракционировали с помощью
колоночной гельхроматографии на колонках с сефадексом G-200 (колонки 21х2 и 22х2 см), границы фракционирования 800±5 кД. На колонку наносили по 3 мл
образцов. Концентрацию белка определяли путем
спектрофотометрии на двулучевом спектрофотометре «Pye Unicam SP–8000» (Англия) и рассчитывали по
формуле:

C = 1,55 х А280 – 0,76 х А260
(мг/мл)

где: А280 и А260 — величины оптической плотности (поглощения): при 280 и 260 нм по методике D.A. Marris [19].

МИКРОБИОЛОГИЯ

УДК: 619:579.873.21

Изучение белков культуральных фильтратов микобактерий

РВЖ • СХЖ • № 1/2011

9

Концентрацию нуклеотидов в фильтратах и суспензиях дезинтегратов рассчитывали по методике Спирина [1], осаждая белки хлорной кислотой:

Cнк = ((А270 – А290)/0,19) х 10,1 (мкг/мл)

где: А270 и А290 — величины оптической плотности при 270 и 290 нм.

Спектры поглощения записывали на спектрофотометре «Pye Unicam SP–8000» (Англия).
Для более детального исследования низкомолекулярных фракций фракционировали надосадочную жидкость суспензии ультразвуковых дезинтегратов, полученных в результате ультрацентрифугирования при 100000 g. Фракционировали с
использованием геля TSK HW-40 Fine на хроматографе фирмы «LKB» (Швеция). Детектирование
проводили при помощи ультрафиолетового оптического монитора «Uvicord — S II» при длине
волны 254 нм.
Культуральный фильтрат отделяли от бактериальной массы, пропуская его через стерилизующие
пластины. Бактериальную массу разбивали на ультразвуковой установке «УЗДН», пропускали через
СФ-фильтры, после чего использовали для исследований.

Результаты и обсуждение

При хроматографии в нативном фильтрате культуры БЦЖ обнаружены нуклеотиды преимущественно с молекулярной массой от 8000 до 48000 Да.
Наибольшая концентрация нуклеотидов — 17,0…
21,0 мкг/мл обнаружена во фракциях 16…18, что
соответствует молекулярной массе 14000…30000 Да
(рис. 1).
Молекулярную массу белковых и нуклеотидных частиц определяли по градуировочной прямой (табл. 1).
Чтобы изучить нуклеотидный состав дезинтеграта, основную массу разрушенных клеточных субстанций и высокомолекулярных соединений осаждали центрифугированием при 100000 g. В надосадочной жидкости выделено 16 фракций, содержащих
белки с диапазоном их молекулярных масс от 5 до
800 кД, однако практически половину (49,3 %) составляют низкомолекулярные белки с молекулярной
массой 5…20 кД.
При анализе состава цитозоля, полученного после осаждения микросомальных фракций, пропущенного через TSK-GEL, выделено 8 белково-нуклеотидных фракций. На белки первой фракции приходилось
94,5 % удельного веса всей суспензии с молекулярной
массой более 10 кД; на остальные семь фракций —
5,5 % удельного веса всей суспензии с молекулярной массой от 4,8 до 2,4 кД.

Выводы

Таким образом, нами впервые доказано, что в КФ
выращенных микобактерий туберкулеза не существует экзогенных продуктов жизнедеятельности
микобактерий белковой природы. При исследовании культуральных фильтратов БЦЖ, полученных
после термической обработки, нами обнаружены
ничтожно малые количества нуклеотидов от 17,0
до 21,0 мкг/мл с преимущественной молекулярной
массой 14…30 кДа, которые появляются в процессе культивирования микобактерий.

№ фракции

Молекулярная
масса, 
кД

№ фракции

Молекулярная
масса,
кД

2
> 800
13
62

3
800
14
48

4
600
15
38

5
470
16
30

6
360
17
23

7
280
18
18

8
220
19
14

9
170
20
11

10
130
21
8,5

11
100
22
6,5

12
80
23
5

1. Определение молекулярной массы фракций
фильтратов и дезинтегратов при пропускании 
через сефадекс G-200

Рис. 1. Результаты фракционирования нативного культурального
фильтрата на сефадексе G-200

Концентрация нуклеотидов, мкг/мл

№ фракнии

А.М. Коваленко, Г.В. Сноз, В.М. Сапегин, В.Ю. Жабина, Р.Ю. Аничин

10

1.
Виноградова Р.П., Кучеренко Н.Е., Литвиненко А.Р. Біологічна
хімія. — К.: Вища школа, 1977.
2.
Еремеев В.В. Новая противотуберкулезная вакцина: мечта
или реальность // Проблемы туберкулеза, 2001; 1: 53—55.
3.
Лысенко А.П. Агеева Т.Н Карпова Г.А. Уровень антител к
антигенам M. bovis и M. tuberculosis в сыворотках крови коров с реакциями на туберкулин // Сборник научн. трудов XI съезда фтизиатров РБ. — Минск, 1998.
4.
Лысенко А.П. Антигены Mycobacterium bovis и атипичных микобактерий, изучение и применение для дифференциальной
диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Автореф. дис….
докт. вет. наук. — Минск, 1994.
5.
Шаров А.Н., Лукава М.А., Лакман Э.Д. Антигены для реакции аглютинации при диагностике туберкулеза // Ветеринария,
1996; 1: 15—17.
6.
Andersen P. Effective vaccination of mice against Mycobacterium tuberculosis infection with a soluble mixture of secreted mycobacterial proteins // Infect. Immun., 1994; 62: 2536—2544.
7.
Andersen P., Andersen A.B., Sorensen, A.L., and Nagai S. Recall
of long-lived immunity to Mycobacterium tuberculosis infection in mice //
J. Immunol., 1995; 154: 3359—3372.
8.
Andersen P., Askgaard D., Ljungqvist L., Bennedsen J. and
Heron I. Proteins released from Mycobacterium tuberculosis during growth
// Infect. Immun., 1991; 59: 1905—1910.
9.
Benjamin R.G., Daniel T.M. Serodiagnosis of tuberculosis using
ELISA (enzyme-linked immunoabsorbent assay) of antibody to Mycobacterium tuberculosis antigen // American Review of Respiratory Disease, 1982; 6 (126): 1013—1016.
10.
Brandt L.K., Elhay M., Rosenkrands I. et al. // Infect.and
Immun., 2000; 68: 791—795.
11.
Coler R.N., Skeiky, Y.A., Vedvick, T., Bement, T., Campos-Neto, A.,
Alderson, M.R., and Reed, S.G. Molecular cloning and immunologic reactivity of a novel low molecular mass antigen of Mycobacterium tuberculosis // J. Immunol., 1998; 161: 2356—2364.
12.
Daniel T.M., Debanne S.M. The serodiagnosis of tuberculosis
and other mycobacterial diseases by enzyme-linked immunosorbent assay //
American Review of Respiratory Disease, 1987; 135: 1137—1151.
13.
Harboe M. , Wiker H., Duncan J., Garcia M., Dukes T. Protein
G-based enzyme-linked immunosorbent assay for anti-MPB70 antibodies in bovine tuberculosis // J. clin. microbiol., 1990; 28: 913—921.
14.
Harboe M., Whelan A., Ulvund G. Generation of antibodies
to the signal peptide of the MPT83 lipoprotein of Mycobacterium tuberculosis // Scand. J. Immunol., 2002; 55 (1): 82—87.
15.
Harth G. and Horwitz, M. A. Export of recombinant Mycobacterium tuberculosis superoxide dismutase is dependent upon both information in the pro tein and mycobacterial export machinery. A model for
studying export of leaderless proteins by pathogenic mycobacteria //
J. Biol. Chem., 1999; 274: 4281—4292.
16.
Harth, G., and Horwitz, M.A. Expression and efficient export of
enzymatically active Mycobacterium tuberculosis glutamine synthetase in
Mycobacterium smegmatis and evidence that the information for export
is contained within the protein // J. Biol. Chem., 1997; 272: 728—735.

17.
Horwitz M.A., Lee B.-W. E., Dillon B.J., and Harth G. Protective immu nity against tuberculosis induced by vaccination with major
extracellular proteins of Mycobacterium tuberculosis // Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 1995; 92: 1530—1534.
18.
Hubbard R.D., Flory C.M., and Collins F.M. Immunization of
mice with mycobacterial culture filtrate proteins // Clin. Exp. Immunol.,
1992; 87: 94—98.
19.
Marris D. A. Spectrophotometric assaes in: Spectrophotometry and spectrofluometry // Washington: IRL Press, 1987.
20.
Nagai S., Wiker, H.G., Harboe M., Kinomoto M. Isolation and
partial characterization of major protein antigens in the culture fluid of
Mycobacterium tuberculosis // Infect. Immun., 1991; 59: 372—382.
21.
Oettinger T., Holm A., Mtoni I.M., Andersen A.B., and Haslov
K. Mapping of the delayed-type hypersensitivity-inducing epitope of secreted MPT64 from Mycobacterium tuberculosis // Infect. Immun., 1995; 63:
4613—4618.
22.
Pal P.G. and Horwitz M.A. Immunization with extracellular proteins of Mycobacterium tuberculosis induces cell-mediated immune
responses and substantial protective immunity in an guinea pig model of
pulmonary tuberculosis // Infect. Immun., 1992; 60: 4781—4792.
23.
Roberts A.D., Sonnenberg M.G., Ordway D.J., Fumey S.K., Brennan P.J., Belisle J.T., and Orme I.M. Characteristics of protective immunity
engendered by vaccination of mice with purified culture filtrate protein antigens of Mycobacterium tuberculosis // Immunology, 1995; 85: 502—508.
24.
Rosenkrands I., Rasmussen P.B., Carnio M., Jacobsen S.,
Theisen M., Andersen P. Identification and characterization of a 29-kilodalton protein from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate recognized
by mouse memory effector cells // Infect. Immun., 1998; 66: 2728—2735.
25.
Rosenkrands I., Weldingh K., Jacobsen S., Hansen C.V., Florio
W., Gianetri I., Andersen P. Mapping and identification of Mycobacterium
tuberculosis proteins by two-dimensional electrophoresis, microsequencing
and immunodetection // Electrophoresis, 2000; 21: 935—948.
26.
Skjot R.L.V., Oettinger T., Rosenkrands I., Ravn P., Brock I.,
Jacobsen S., Andersen P. Comparative evaluation of low mass T-cell antigens from Mycobacterium tuberculosis identify ESAT-6 family members
as immunodominant // Infect. Immun., 2000; 68: 214—220.
27.
Sorensen A.L., Nagai S., Houen G., Andersen P., and Andersen
A.B. Purification and characterization of a low-molecular-mass T-cell antigen
secreted by Mycobacterium tuberculosis //Infect. Immun., 1995; 63:
1710—1717.
28.
Webb J.R., Vedvick T.S., Alderson M.R., Guderian J.A., Jen, S.S.,
Ovendale, P.J., Johnson S.M., Reed S.G., Skeiky Y.A.W. Molecular cloning,
expression, and immunognicity of MTB12, a novel low-molecular-weight
antigen secreted by Mycobacterium tuberculosis // Infect. Immun., 1998;
66: 4208—4214.
29.
Wiker H.G., Harboe M., and Nagai S.A localization index for
distinction between extracellular and intracellular antigens of Mycobacterium tuberculosis // J. Gen. Microbiol., 1991; 137: 875—884.
30.
Wiker H.G., Michell S.L., Hewinson R.G., Spiering, E., Nagai S.,
Harboe M. Cloning, expression and significance of MPT53 for identification of secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis // Microb.
Pathog., 1999; 26: 207—219.

Summary
A.M. Kovalenko, G.V. Snoz, V.M. Sapegin, V.J. Zhabina, R.J. Anichin. Study of proteins isolated from Mycobacterium. More than 20 years scientists of the different countries study proteins mycobacterial cultural filtrates. Our
researches establish proteinnucleinic structure cultural filtrates grown up mycobacterium of tuberculosis. Absence
in the filtrates highgrade exogenous mycobacterium proteins is established.

Б и б л и о г р а ф и я