УДАЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА УСИЛИВАЕТ СПОНТАННЫЙ ЭКЗОЦИТОЗ В НЕРВНО-МЫШЕЧНОМ СИНАПСЕ МЫШИ ЧЕРЕЗ МЕХАНИЗМ ЗАВИСИМЫЙ ОТ НАДФН-ОКСИДАЗЫ
Бесплатно
Основная коллекция
Издательство:
НИИ ноpмальной физиологии им. П.К. Анохина
Год издания: 2015
Кол-во страниц: 4
Дополнительно
Скопировать запись
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов.
Для полноценной работы с документом, пожалуйста, перейдите в
ридер.
4. N. E. Sharanova, S. S. Pertsov, N. V. Kirbaeva, et al., Byull. Eksp. Biol. Med., 156, No. 11, 532-535 (2013). 5. Yang P., Gao Z., Zhang H. et al., Neuropsychiatr. Dis. Treat., 11, 597-607 (2015). DOI:10.12737/12444 УДАЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА УСИЛИВАЕТ СПОНТАННЫЙ ЭКЗОЦИТОЗ В НЕРВНО МЫШЕЧНОМ СИНАПСЕ МЫШИ ЧЕРЕЗ МЕХАНИЗМ ЗАВИСИМЫЙ ОТ НАДФН ОКСИДАЗЫ Петров А.М., Касимов М.Р., Сычев В.И., Зефиров А.Л. Кафедра нормальной физиологии Казанского государственного медицинского университета (зав. - чл.-корр. РАН А.Л. Зефиров) fysio@rambler.ru Ключевые слова: экзоцитоз, холестерин, активные формы кислорода, синапс Удаление мембранного холестерина с помощью метил-β-циклодекстрина (МЦД) угнетает вызванный, но усиливает спонтанный экзоцитоз синаптических везикул [1-4]. Механизм этого феномена изучен недостаточно. In vivo снижение содержания холестерина может происходить в синаптических мембранах в результате усиления нейрональной активности [5]. В мозжечке активация ряда протеинкиназ вносит вклад в опосредованное МЦД усиление спонтанного экзоцитоза [4]. В нервно-мышечном синапсе лягушки нами было показано, что МЦД стимулирует NADPH-оксидазу, продуцирующую активные формы кислорода (АФК), которые стимулируют TRPV1-каналы. Вход Са2+ через эти каналы активирует фосфатазу PP2B, что частично отвечает за усиление спонтанного экзоцитоза [3]. В данном исследовании мы обнаружили роль пути NADPH-оксидаза/АФК/TRPV1-каналы в потенциации спонтанного экзоцитоза в двигательном нервном окончании мыши. Методика исследования. Эксперименты проведены на диафрагмальной мышце в условиях перфузии раствором Кребса (24С, pH 7.4.). Для оценки спонтанного экзоцитоза регистрировали миниатюрные потенциалы концевой пластики (МПКП) и изменение свечения маркера FM1-43, который предварительно загружался в синаптические везикулы стимуляцией нерва 3 мин 20Гц [3]. За внутриклеточной продукцией АФК следили с помощью маркера H2DCF. Внеклеточный уровень H2O2 определяли, используя AmplexRed reagent H2O2 assay kit. [Ca2+]i измеряли с помощью индикатора Fluo-4AM. Результаты. Аппликация 1 мМ МЦД не изменяла частоту МПКП и не вызывала выгрузку FM1-43 из нервных окончаний. Однако в ответ на перфузию 10 мМ МЦД наблюдалось увеличение частоты МПКП, а FM1-43 начинал выходить из нервных окончаний. Это указывает на усиление спонтанного экзоцитоза. МЦД 1 мМ не изменял свечение H2DCF в синаптическом регионе, тогда как в ответ на 10 мМ МЦД флуоресценция H2DCF быстро возрастала. Обработка 10 мМ МЦД увеличивала концентрацию H2O2 во внеклеточной среде. Усиление флуоресценции H2DCF и продукции H2O2, вызванные 10 мМ МЦД, полностью блокировались ингибиторами NADPH-оксидазы (200 мкМ апоцин, 1 мМ AEBSF), но не ингибитором митохондриального комплекса I (5 мкМ ротенон). Это указывает на быструю активацию NADPH-оксидазы при удалении холестерина. Для проверки участия АФК в усилении спонтанного экзоцитоза использовали