RESULTS
Ex vivo studied the effect of stimulation of α1-adrenergic 

receptors by methoxamine on heart rate and systolic pressure of the 
left ventricle of rat heart. Stimulation of α1-AR methoxamine at a 
concentration of 10-10 M to 3 minutes resulted in slowing of the heart
(12%) and reducing the force of contraction of 12%. After 5 minutes, 
the heart rate decreased by 28.7% (p≤0.01), for 15 minutes, 35% 
(p≤0.05). 
Throughout 
the 
experiment 
the 
maximum 
decrease 
in 

contractility of the left ventricle was 27,8% (p≤0.05). Immediately 
after the introduction methoxamine at a concentration of 10-8 M, an 
increase in the contractility of the left ventricle by 12% (p≤0.05), 
the value of LVP changed with 62,35±5,04 to 69,8±6.8 mm Hg. On the 7-
minute perfusion was observed a decrease in contraction force by 65% 
(p≤0.01). Methoxamine at a concentration of 10-8 M caused a reduction in 
heart rate. The maximum reduction in heart rate was 29.5% (p≤0.05). 
Thus, stimulation of α1-AR in Langendorff perfused heart was led to 
bradycardia regardless of the concentration of agonist. Methoxamine at 
a concentration of 10-8
M resulted in mixed effects contractility. 

Experiments with different concentrations of the nonselective agonist 
showed a positive chronoinotropic dependence.

REFERENCES
1. Jensen B.C., O’Connell T.D., Simpson P.C. // J Mol Cell 

Cardiol.  2011. Vol. 51(4).  P: 518 – 28. 

2.  Philipp M., Brede M., Hein L. // Am J. Physiol. Regul. Integr. 

Comp. Physiol. 2002. Vol.283, N 2. P: 287-295.

3. Wright C.D., Chen Q., Baye N.L., Huang Y., Healy C.L., 

Kasinathan S. et al. // Circ Res. 2008. Vol. 103(9). P: 992–1000.

4. Ziyatdinova N.I., Dementieva R.E., Fashutdinov L.I., Zefirov 

T.L. // Bull. Exp Biol. Med. 2012. Vol.154, N 2. P: 184-185.

DOI:10.12737/12355

АНТИГИПОКСИЧЕСКАЯ И ФЕРМЕНТ-ИНГИБИТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ АФОБАЗОЛА 

И ЕГО ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА

Золотов Н.Н.*, Назарова Г.А.**, Колясникова К.Н.*

*ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В.Закусова», ФГБНУ «НИИ нормальной 

физиологии имени П.К.Анохина», Москва, Россия

zolotovnn@gmail.com

Ключевые слова:
гипоксия, афобазол, дипептидилпептидаза 
IV, 

аденозиндезаминаза, мыши

Селективный анксиолитик афобазол разработан в России и имеет 

несколько молекулярных мишеней – сигма-1-рецептор, рецептор мелатонина 
и моноаминоксидазу [1]. Большое количество лигандов сигма-1-рецептора, 
такие как галоперидол, различные опиаты и нейропептиды. Среди последних 
пептидов большой интерес представляет нейропептид Y (NPY), который 
обладает, 
анксиолитическим 
и 
нейропротективным 
действием 
и 

инактивируется 
в 
организме 
путем 
ферментативного 
расщепления 

пролинспецифическим ферментом дипептидилпептидазой IV (КФ 3.4.14.5., 

DPP-4) [2]. Фермент –
широко распространенная сериновая протеаза, 

способная 
отщеплять 
дипептиды 
с 
остатками 
пролина 
(аланина) 
в 

предпоследнем положении от аминоконцевой части субстрата. Многие 
пептидные гормоны и белки, которые, как было показано, являются 
субстратами DPP-4, в последние годы находились в центре исследований в 
психонейроэндокринологии. 
С 
учетом 
информации 
о 
потенциальной 

активности пептидных гормонов, таких как вещество P или NPY и влияния 
DPP-4 на них, можно сказать, что изменения активности фермента при 
некоторых психических и психосоматических заболеваниях в последние годы 
были недооценены. DPP-4 также играет важную роль в метаболизме глюкозы. 
Специфически
и 
с 
высоким 
сродством 
DPP-4 
связывается 
с 

аденозиндезаминазой (КФ 3.5.4.4., ADA) [3]. Субстратами DPP-4 являются 
пролин- или аланинсодержащие пептиды. В ряде публикаций было показано, 
что психотропные препараты на базе NPY могут использоваться в 
комбинации 
с 
ингибиторами 
DPP-4. 
Эти 
ингибиторы 
известны 
как 

лекарственные препараты для лечения сахарного диабета 2 типа –
Ситаглиптин (Мерк) и Вилдаглиптин (Новартис). Недавние исследования 
показали роль DPP-4 в механизмах развития тревоги и депрессии [4]. На 
основании этих данных мы предположили, что молекулярный механизм 
анксиолитического и нейропротекторного эффектов афобазола и его 
метаболита М-11 связан с ингибированием DPP-4 [5]. 

Цель исследования –
изучить антигипоксическую и ингибиторную 

активности афобазола и его основного метаболита М-11 на DPP-4 и ADA.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 
Антигипоксические свойства афобазола и М-11 изучали в тесте 

гиперкапнической гипоксии

на самцах мышей линии BALB/C (n=70) с массой тела 19,5±2,7 г. 

Вещества вводили внутрибрюшинно в дозах 5 -
10 мг/кг за 60 мин до 

тестирования. После эксперимента животных забивали и отбирали кровь. 
После центрифугирования плазму крови хранили в жидком азоте до 
ферментного анализа. Определение DPP-4 и ADA
проводили с GlyPro-7-

амидо-4-метилкумарином 
и 
аденозином 
в 
качестве 
субстратов. 

Достоверность 
межгрупповых 
различий 
выявляли 
с 
помощью 

непараметрических критериев Манна-Уитни и Вилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ
Очищенная 
из 
плазмы 
крови 
человека 
DPP-4 
ингибируется 
по 

конкурентному механизму афобазолом с IC50, равной 150±18 нМ. Метаболит 
М-11 также ингибирует DPP-4 с IC50 около 169±19 нМ. Известные 
ингибиторы DPP-4 показали IC50 5,1±2,3 нМ (Вилдаглиптин) и 24,7±9,4 нМ 
(Ситаглиптин). Введение афобазола приводит к статистически значимому 
увеличению продолжительность жизни мышей на обеих моделях гипоксии и 
наиболее эффективная доза составила 10 мг/кг. Активности DPP-4 и ADA в 
плазме крови мышей после моделирования гипоксии возросли на 30,2% 
(p<0,05) по сравнению с контрольной группой. При введении афобазола и 
М-11 одновременно возросла продолжительность жизни мышей (36,7%, 
p<0,05) и снизилась активность обоих ферментов (28.8% и 25.2%, 
соответственно; p<0.05).

ВЫВОДЫ 
Известно, что DPP-4 обладает сродством к ADA, превращающей 

аденозин в инозин. Можно предположить, что индуцированный гипоксией 
рост уровня DPP-4 приводит к накоплению аденозина через связывание ADA.