Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии

ПРАКТИКУМ
ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ
МИКРОБИОЛОГИИ
И ИММУНОЛОГИИ

Москва
ИНФРА-М
2019

УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ

В.Н. КИСЛЕНКО

Рекомендовано 
в качестве учебного пособия для студентов
высших учебных заведений, обучающихся
по направлению подготовки 36.05.01 «Ветеринария»
(квалификация «ветеринарный врач»)

УДК 619:579(075.8)
ББК 48я73
 
К44

Кисленко В.Н. 
 Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии : учеб. 
пособие / В.Н. Кисленко. — М. : ИНФРА-М, 2019. — 232 с. + Доп. 
материалы [Электрон ный ресурс; Режим доступа http://www.znanium.
com]. — (Высшее образование: Специалитет).

ISBN 978-5-16-010543-7 (print)
ISBN 978-5-16-102559-8 (online)
Практикум состоит из двух разделов. Раздел «Общая микробиология» 
содержит сведения о правилах работы в бактериологической лаборатории, 
описание основных микробиологических, генетических и иммунологических 
методов изучения микроорганизмов. В разделе «Возбудители инфекционных 
болезней» перечислены методы лабораторной диагностики, дифференциации 
возбудителей и дан перечень применяемых биопрепаратов. Приведены 
методические указания к проведению практических занятий для преподавателей.
Для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 
36.05.01 «Ветеринария».

К44

УДК 619:579(075.8)
ББК 48я73

© Кисленко В.Н., 2005, 2016 
ISBN 978-5-16-010543-7 (print)
ISBN 978-5-16-102559-8 (online)

Р е ц е н з е н т ы:
В.И. Плешакова, доктор ветеринарных наук, профессор (Институт ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета);
П.И. Барышников, доктор ветеринарных наук, профессор (Институт ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета)

Оригинал-макет подготовлен в НИЦ ИНФРА-М

ООО «Научно-издательский центр ИНФРА-М»
127282, Москва, ул. Полярная, д. 31В, стр. 1
Тел.: (495) 280-15-96, 280-33-86. Факс: (495) 280-36-29
E-mail: books@infra-m.ru        http://www.infra-m.ru

Подписано в печать 24.03.2017.
Формат 6090/16. Бумага офсетная. Гарнитура Newton. 
Печать цифровая. Усл. печ. л. 14,5. 
ПТ10.

ТК  325400-883955-280416

ФЗ 
№ 436-ФЗ
Издание не подлежит маркировке 
в соответствии с п. 1 ч. 4 ст. 11

Отпечатано в типографии ООО «Научно-издательский центр ИНФРА-М»
127282, Москва, ул. Полярная, д. 31В, стр. 1
Тел.: (495) 280-15-96, 280-33-86. Факс: (495) 280-36-29

Материалы, отмеченные знаком 
, доступны 
в электронно-библиотечной системе Znanium.com

ВВЕДЕНИЕ

Ветеринарные лаборатории — это учреждения государственной 
ветеринарной службы, деятельность которых направлена на обеспечение благополучия в животноводстве, предупреждение и ликвидацию болезней и гибели животных, а также на охрану населения от болезней, общих для животных и человека. По назначению 
ветеринарные лаборатории бывают районные, межрайонные (зональные), областные (краевые) и республиканские.

Основная задача ветеринарных лабораторий — установление 
точного диагноза болезней сельскохозяйственных животных, 
включая птиц, пушных зверей, рыб и пчел, а также проведение 
экспертизы мяса, молока и других пищевых продуктов животного 
и растительного происхождения. В лабораториях также выполняют научные работы, осуществляют производство некоторых биостимуляторов, антибиотиков и др.

Материалом для лабораторных исследований служат кровь, 
моча, мокрота, молоко, фекалии, содержимое абсцессов (гной), 
полученные при жизни животного; кусочки паренхиматозных органов или других тканей после их гибели, пробы объектов окружающей среды (вода, воздух, почва, корма, растения, смывы с предметов ухода). Материал в лаборатории исследуют бактериологическими, серологическими, гистологическими, биохимическими, 
микологическими и токсикологическими методами, для чего должны быть созданы необходимые условия (специально отведенные 
помещения, оборудование, микроклимат и др.).

Лаборатория занимает отдельное здание, расположение вдали 
от проезжих дорог. В ней должны быть приемное отделение, патологоанатомический, бактериологический, серологический, биохимический и вирусологический отделы, а также специальные помещения для термостатов, мытья посуды, автоклавная. В комнате 
для мытья посуды находятся столы, раковины, горячее и холодное 
водоснабжение, газовая или электрическая плита, стеллажи для 
вымытой посуды, вытяжной шкаф, эмалированные ванны, тазы и 
другие емкости, раствор кислоты в стеклянных сосудах для обеззараживания пипеток, предметных стекол и другой посуды. Отдельное помещение отводят под бактериологическую кухню (средоварочная), где готовят питательные среды для культивирования

3

микроорганизмов, подготавливают посуду для стерилизации. 
Здесь же в шкафах хранят стерильную посуду и хорошо упакованные химические вещества, компоненты питательных сред.

Для выполнения работы в асептических условиях оборудуют 
специальные изолированные помещения — боксы (англ, box — коробка), состоящие из собственно бокса и предбоксника. Используют также настольные боксы, предметы и воздух в которых обеззараживают лампами УФИ, и ламинарные шкафы, где кроме этого применяют активное удаление воздуха.

Лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, белых крыс, кроликов и др.) размещают в виварии. Как правило, в 
виварии содержат также здоровых баранов-доноров, кровь которых используют для реакции связывания комплемента (РСК) и 
приготовления питательных сред. Зараженных лабораторных животных содержат в изолированном помещении.

Кроме того, в здании есть комнаты для специалистов, обслуживающего персонала, кабинет заведующего, библиотека, весовая, 
раздевалка, склад и др.

Чтобы поддерживать надлежащую чистоту, пол в комнатах покрывают линолеумом или кафельной плиткой. Стены и потолки, 
как правило, гладкие (без карнизов и лепных украшений), с закругленными углами, окрашенные в светлые тона масляной краской. Потолки можно белить известью. Желательно стены облицевать пластиком или плиткой от пола до потолка.

В лаборатории должны быть горячая и холодная вода, канализация, 
педальные ведра для мусора, которые ежедневно освобождают, моют 
и дезинфицируют, полотенца, мыло и дезинфицирующий раствор. В 
комнатах находится только самое необходимое оборудование: столы, 
шкаф для хранения мелкой аппаратуры, красок, реактивов, посуды, 
инструментов и т. п. Столы обычно устанавливают перед окнами. Они 
должны быть устойчивыми, удобными, высотой 80 см, с закраинкой. 
Поверхность столов покрывают пластиком или линолеумом, стеклом 
или белой специальной краской. На столе размещают микроскоп, а 
также необходимые предметы для бактериологической работы.

Бактериологический метод исследования, как правило, включает микроскопию, выделение и изучение свойств чистой культуры возбудителя болезни и заражение лабораторных животных 
(биологическую пробу). Результаты бактериологического анализа 
за подписью заведующего отделением или директора лаборатории 
сообщают только официальным лицам: ветеринарному врачу, зооинженеру, руководителю предприятия.

Оборудование микробиологической лаборатории. Для работы в 
лаборатории необходимы следующие приборы и аппараты: биологические иммерсионные микроскопы с дополнительными приспособлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство, темнопольный конденсор и др.), люминесцентные микроскопы, термостаты, аппаратура для стерилизации, pH-метры, аппараты для

4

получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, 
технические и аналитические весы, аппаратура для фильтрования 
(фильтр Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппарат для 
изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов (бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.), лабораторная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) и др.

В лаборатории выделено специальное место для окраски микроскопических препаратов, где находятся растворы специальных 
красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое 
рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, банкой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы 
лаборатория должна располагать необходимыми питательными 
средами, химическими реактивами, диагностическими препаратами и другими лабораторными материалами. В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания 
микроорганизмов, постановки серологических реакций.

Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура:

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная 
температура. Оптимальная температура для размножения многих 
микроорганизмов составляет 37 °С. Термостаты бывают воздушными и водяными.

2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

3. Холодильники. Используют в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных 
сред, крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препаратов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов ниже 
О °С предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура —20 °С и ниже.

4. Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганизмов, 
эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными режимами работы.

5. Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Предназначен для воздушной стерилизации лабораторной посуды и 
других материалов.

6. Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для стерилизации паром под давлением. В микробиологических лабораториях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, переносные).

Правила работы в микробиологической лаборатории. Микробиолог имеет дело преимущественно с чистыми культурами микроорганизмов, которые являются потомством одной клетки. Поскольку в воздухе и на поверхности предметов в лаборатории (на столах, 
приборах, инструментах, а также на одежде, руках и др.) всегда

5

присутствует множество разнообразных микроорганизмов, следует постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых культур. Поэтому при работе в микробиологической лаборатории необходимо строго соблюдать определенные правила, одно из которых — поддержание чистоты, включая ежедневную гигиеническую 
уборку всех помещений.

Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхностях существуют различные способы дезинфекции.

Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. 
Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице температур снаружи и 
внутри помещения. Продолжительность проветривания не менее
30.. .60 мин.

Более эффективный и наиболее часто применяемый способ 
обеззараживания воздуха — воздействие ультрафиолетовым излучением (УФИ), обладающим высоким антимикробным действием 
и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор 
микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности ультрафиолетовое излучение не проходит через обычное стекло и легко поглощается частицами пыли. Поэтому для стерилизации время облучения составляет от 30 мин до нескольких часов в зависимости от степени загрязненности воздуха.

В качестве источника УФИ используют бактерицидные лампы 
(УФЛ). Излучателем в них служит электрическая дуга, возникающая в парах ртути низкого давления и испускающая линейный 
спектр в ультрафиолетовой области, более 80 % энергии которого 
приходится на длину волны 2,5 нм.

Бактерицидная лампа представляет собой стеклянную трубку, 
вмонтированную между двумя электрическими контактами и 
включаемую в сеть через дроссель. Трубка изготовлена из специального стекла, пропускающего все лучи с длиной волны 2,5 нм и 
задерживающего излучение с длиной волны короче 2 нм. Следует 
помнить, что УФИ вызывает острое воспаление роговицы глаз с 
характерным слезотечением и светобоязнью вскоре после облучения. Поэтому для того чтобы прямые или отраженные ультрафиолетовые лучи не воздействовали на глаза, применяют защитные 
очки. В небольших помещениях при включенной бактерицидной 
лампе находиться нельзя.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории протирают растворами различных дезинфицирующих веществ. Обработка пылесосом удаляет с предметов пыль и значительную часть 
микрофлоры. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего 
используют 0,5...3%-й водный раствор хлорамина. Особенно тщательно следует дезинфицировать поверхность стола, на котором 
проводится работа с микроорганизмами. Ее необходимо протирать дезинфицирующим раствором как перед началом работы, так 
и после окончания. На рабочем столе недопустимы лишние пред6

меты. Все реактивы и растворы должны быть снабжены этикетками и стоять на строго определенных местах. В лаборатории нельзя 
есть, пить, курить. Работать следует в халатах.

В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на 
плотных и в жидких питательных средах, которые разливают в 
пробирки, колбы или чашки Петри. Посуду и питательные среды 
предварительно стерилизуют. Внесение клеток микроорганизмов 
в стерильную среду называют посевом, или инокуляцией. Посев 
(или пересев) микроорганизмов требует четкого соблюдения определенных правил, чтобы предохранить исследуемую культуру от 
загрязнения посторонними микроорганизмами.

Посевы микроорганизмов в стерильные среды лучше всего осуществлять в особых помещениях — боксах. Бокс представляет собой небольшую изолированную комнату, разделенную перегородкой на две части. В основное рабочее помещение бокса входят через тамбур, имеющий раздвижную дверь, что исключает резкое 
перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посторонней микрофлоры. Оборудование бокса включает стол с легкомоющейся поверхностью, стул, газовую или спиртовую горелки, 
бактерицидную лампу, укрепленную в специальном штативе или 
смонтированную на потолке бокса. В боксе удобно иметь подсобный стол, на котором размещают необходимые во время работы 
предметы. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок периодически моют и протирают дезинфицирующими растворами. 
Перед работой бокс облучают бактерицидной лампой в течение
40...60 мин.

После посева пробирки или другие сосуды, в которых выращивают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью 
терморегуляторов поддерживается постоянная температура. Посуду с культурами микроорганизмов, подлежащими утилизации, 
подвергают автоклавированию, чтобы убить клетки, и только после этого моют. В посуду с плотными средами заливают дезинфицирующий раствор, который через сутки удаляют, а посуду моют. 
Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приводит к возникновению бактериального аэрозоля, представляющего 
опасность для здоровья сотрудников.

Все сотрудники лабораторий, а также кафедр микробиологии, 
аспиранты, студенты, приходящие на занятия и работающие в научно-студенческих кружках, прежде чем приступить к работе с заразным материалом (культуры патогенных микробов, трупы экспериментально зараженных животных, выделения больных животных, кровь и др.) обязаны ознакомиться и строго соблюдать 
следующие правила работы и техники безопасности в ветеринарных бактериологических лабораториях:

в помещение лаборатории входят только в специальной одежде: в халате, белой шапочке или косынке. Халат должен быть наглухо застегнут, волосы убраны под шапочку;

7

в лабораторию нельзя проносить посторонние вещи, продукты 
питания. Портфели и сумки складывают в специально выделенном месте;

в помещении лаборатории категорически запрещается принимать пищу, пить и курить;

каждому работнику (студенту) под определенным номером выделяют рабочее место, микроскоп и другие принадлежности;

на рабочем месте должно находиться оборудование только для 
выполнения конкретного задания. Обычно это набор красок, колба с дистиллированной водой, сливная чашка, банки с чистыми и 
отработанными стеклами, бактериологическая петля, штатив, 
банка с дезинфицирующим раствором;

перед началом работы необходимо проверить наличие и исправность приборов, посуды, газовых горелок (спиртовок) и пр. О 
замеченных недостатках и неисправностях следует сообщить ответственному, а на учебных занятиях — преподавателю;

во избежание взрыва нельзя зажигать одну спиртовку (или газовую горелку) от другой; пользуются только спичками;

нельзя касаться проводов и контактных частей электросети металлическими и другими предметами;

студенты без ведома преподавателя или обслуживающего персонала не должны включать электроприборы и аппаратуру;

студенты приступают к выполнению задания только с разрешения преподавателя; ход работы должен строго соответствовать 
изучаемой методике;

каждый сотрудник и студент должен соблюдать опрятность в 
работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;

материал, используемый на учебных занятиях, принимают за 
особо опасный;

при распаковке материала, присланного для исследования, необходимо соблюдать осторожность: банки снаружи обтирают дезинфицирующим раствором и ставят только на подносы или кюветы;

при исследовании поступившего материала и при работе с бактериальными культурами соблюдают общепринятые в бактериологической практике технические приемы, исключающие возможность инфицирования работника;

в процессе изучения возбудителей инфекционных болезней 
студенты должны усвоить особенности правил техники безопасности при работе с конкретными возбудителями;

вскрытие трупов экспериментальных (лабораторных) животных производят в специальной одежде на оборудованном столе с 
помощью необходимых инструментов, используя для этих целей 
кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после 
вскрытия на стол класть запрещается: их помещают в стакан с дезраствором или обжигают над пламенем горелки;

при работе с жидким инфицированным материалом используют резиновые баллоны, соединенные с пипеткой;

8

жидкости, содержащие патогенных микробов, переливают над 
сосудом с дезинфицирующим раствором;

если в процессе работы патологический материал случайно попал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. При попадании зараженного материала на кожу, конъюнктиву, в ротовую полость принимают экстренные меры к обеззараживанию;

по окончании работы патологический материал, использованные культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность стола обеззараживают;

в конце занятия бактериальные культуры и другой материал 
студенты должны сдать преподавателю, а рабочее место привести 
в порядок. Выносить из лаборатории пробирки с культурами, препараты (мазки) и другие предметы категорически запрещается;

патологический материал и бактериальные культуры, необходимые для дальнейшей работы, оставляют на хранение в закрытом 
рефрижераторе или сейфе;

перед уходом из лаборатории необходимо снять халат, руки 
тщательно вымыть и обработать йодированным спиртом. Выходить за пределы лаборатории в халатах запрещается;

соблюдение правил работы и техники безопасности на учебных 
занятиях по микробиологии контролируют дежурные. С техникой 
безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты 
знакомятся на первом занятии, о чем расписываются в журнале.

Соблюдая перечисленные правила, сотрудник в лаборатории 
обеспечивает стерильность манипуляций и предупреждает возникновение внутри- и внелабораторного заражения.

В е д е н и е  
л а б о р а т о р н ы х  
з а п и с е й .  Тетрадь для 
лабораторных работ служит документом, позволяющим контролировать правильность полученных данных. В нее должны быть занесены 
сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. Запись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, 
например: 1) название опыта, дата его постановки и окончания; 2) 
объект исследования; 3) условия проведения опыта; 4) основной 
принцип используемого метода анализа; 5) результаты опыта.

Полученные результаты подробно описывают, цифровой материал сводят в таблицы, если необходимо, в графики, диаграммы, 
рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться собственными наблюдениями и выводами, занесенными в рабочую 
тетрадь.

В процессе работы студенты овладевают техникой и методами 
микроскопирования, знакомятся с морфологией представителей 
различных групп микроорганизмов, осваивают подход к выделению чистых культур и их идентификации, изучают влияние условий и факторов среды обитания на рост и образование разнообразных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и знакомятся 
с некоторыми методами генетических исследований бактерий.

9

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Т е м а  1. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ 
МИКРООРГАНИЗМОВ

При выполнении любых микробиологических исследований 
необходимо точно знать особенности строения микроорганизмов. 
Эти сведения могут быть получены только путем изучения данного организма с помощью микроскопа. Первый простейшего устройства оптический микроскоп был сконструирован Антони ван 
Левенгуком (рис. 1).

В настоящее время многие вопросы цитологии микробов решаются на уровне электронной микроскопии. Это, однако, не значит, что традиционная микроскопия в видимом свете потеряла 
свое значение. Первоначальный подсчет количества микроорганизмов, первичная их идентификация, изучение роста и отдельных элементов структуры производят с помощью светового микроскопа. Микробиологические лаборатории оснащены микроскопами различных моделей: МБР-1, МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, 
МБИ-6, «Биолам», Р-1 и др. Микроскопированием определяют 
морфологические особенности микроорганизмов, их тинктори- 
альные (способность окрашиваться теми или иными красителями)

свойства, подвижность, наличие 
специальных 
структурных 
элементов (спора, капсула).

Современный микроскоп состоит из оптической и механической частей. К м е х а н и ч е с к о й  
ч а с т и  
относятся штатив, тубус (труба) с револьверным 
устройством, предметный столик, 
механизм тонкой и грубой наводки (рис. 2).

в ш :ф -— 4 
Штатив состоит из двух час- 
|||врч/ 
тей: держателя трубы микроскопа

Рис. 1. Микроскоп Антони ван Левенгука:

1—линза; 2— булавка, к которой крепится объект; 
3 и 4— фокусирующие винты

10