НЕЙРОГЕНЕЗ В ЗРЕЛОМ МОЗГЕ МЫШЕЙ C57BL/6: СРАВНИТЕЛЬНОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МАРКЕРОВ СИНТЕЗА ДНК BrdU И EdU
Бесплатно
Основная коллекция
Издательство:
НИИ ноpмальной физиологии им. П.К. Анохина
Год издания: 2015
Кол-во страниц: 4
Дополнительно
Скопировать запись
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов.
Для полноценной работы с документом, пожалуйста, перейдите в
ридер.
НЕЙРОГЕНЕЗ В ЗРЕЛОМ МОЗГЕ МЫШЕЙ C57BL/6: СРАВНИТЕЛЬНОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МАРКЕРОВ СИНТЕЗА ДНК BrdU И EdU В.В.Шерстнев, А.К. Нанаев, М.А. , Грудень ФГБНУ« НИИ нормальной физиологии им.П.К. Анохина» m.gruden@nphys.ru Проведено сравнительное исследование региональных особенностей нейрогенеза на срезах зрелого мозга методами иммунофлюоресценции и/или химической детекции 2-х аналогов тимидина BrdU и EdU при их раздельном и совместном внутрибрюшинном введении мышам C57BL/6. Получены результаты, свидетельствующие об эффективности использования EdU для экспериментального изучения постнатального нейрогенеза. Ключевые слова: зрелый мозг, нейрогенез, маркеры пролиферации, BrdU, EdU, мыши. В современных исследованиях постнатального нейрогенеза широко используютсинтетический аналог тимидина -5-bromo-2'-deoxyuridine, BrdU, применение которого имеет ряд существенных ограничений [2]. В этой связи, особый интерес вызывает использование другого аналога тимидина5ethynyl-2'-deoxyuridine, EdU, обладающего более высокой чувствительностью, а также выявления метки с помощью быстро протекающей химической реакции, не требующей применения моноклональных или поликлональных антител, что существенно повышает эффективность детекции и количественной оценки пролиферирующих клеток в зрелом мозге [3]. Однако, сравнительного исследования по количественной оценке пролиферирующих клеток в структурах зрелого мозга помимо зубчатой извилины гиппокампа с помощью BrdU и/или EdU не проводилось. Целью работы явилось проведение сравнительного количественного анализа распределения маркеров синтеза ДНК BrdU и EdU в пролиферирующих клетках различных структур зрелого мозге в условиях раздельного и совместного системного введения маркеров мышам. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на половозрелых мышах-самцах линии C57BL/6 весом 26 -28 г (n=40) с соблюдением этических норм работы с лабораторными животными в соответствии с принципами гуманности, изложенными в директиве Европейского сообщества (86/600 ЕС). Для оценки выявляемости BrdU (Sigma, USA) и EdU (Invitrogen, USA) использовали подобранную экспериментально (n=10) оптимальную дозу маркеров (150 мг/кг/в 50 мкл 0,9 % NaCl) при их индивидуальном (n=20) или совместном (n=10) внутрибрюшинном введении. Контрольным животным (n=3) вводили 0,9 % NaCl. Через 1 или 7 суток мышей декапитировали, мозг замораживали в жидком азоте, хранили при -85°C. BrdU выявляли как описано ранее [1]. Химическую детекцию EdU проводили по протоколу Click-iT™ EdU Imaging Kit (Invitrogen, USA). Подсчёт BrdU- и EdU- положительных клеток (BrdU+ и EdU+) проводили на 117 серийных срезах у каждого животного в отделах гиппокампа, коре мозга, черной субстанции, сосудистом сплетении, стенках желудочков мозга и мозговой оболочке (от-2.12 до -6.04 mm относительно Bregma). Визуализацию окрашенных срезов проводили на микроскопе OLYMPUS BX51 Reflected fluorescence system (Olympus,USA) и