1/2010

Д
Д

иабетическую нефропатию (ДН), являющуюся след-
ствием специфического (микроангиопатия) поражения
почек при сахарном диабете (СД), относят к острейшим
медико-социальным проблемам и приоритетам национальных
систем здравоохранения большинства стран мира из-за ее рас-
пространенности (страдает по меньшей мере 30–40% больных
СД 1 типа (СД1) и 20–30% − СД 2 типа (СД2)), а также практи-
чески облигатного прогрессирования, ведущего к развитию гло-
мерулосклероза и хронической почечной недостаточности
(ХПН) [1–3].
В настоящее время ДН − самая частая причина ХПН. В ге-
модиализных центрах развитых стран больные СД (35–40%)
вытеснили на вторую-третью позицию пациентов с такими пер-
вичными заболеваниями почек, как гломерулонефрит, пиело-
нефрит и поликистоз [4–6]. Впечатляющие успехи клинической
эндокринологии, достигнутые в последние десятилетия, обна-
жили парадоксальную ситуацию, которая складывается таким
образом, что чем лучше мы лечим пациентов с СД, тем большее
их число доживает до пожилого возраста и той стадии развития
болезни, при которой высока вероятность развития ХПН. Бли-
жайшее будущее сулит лишь усугубление проблемы − распро-
страненность диабетического гломерулосклероза возрастет,
и, по-видимому, необходимо быть готовыми к тому, что через

10-20 лет каждый второй, нуждающийся в заместительной по-
чечной терапии, будет пациентом с ДН. В связи с этим стано-
вится понятной высокая потребность в фундаментальных и
прикладных исследованиях, направленных на разработку во-
просов патогенеза, диагностики, профилактики и лечения ДН.
В патогенезе ДН тесно переплетены метаболические, гемо-
динамические, гемостатические, иммунные и другие факторы,
многие из которых генетически детерминированы. Однако,
если о генетической предрасположенности к развитию опреде-
ленного типа СД, его формы (например, моногенные формы
или MODY-типы СД, митохондриальный диабет, а также его
специфические формы, связанные с генетическими дефектами
в действии инсулина) хорошо известно, то роль генетической
конституции в подверженности (или, наоборот, защищенности)
к реализации варианта заболевания с поражением почек из-
учена в значительно меньшей степени [7–10]. В частности,
остается открытым вопрос о частоте встречаемости у больных
ДН генетически обусловленных гематогенных тромбофилий,
а также их клиническом и прогностическом значении.
Целью настоящего исследования явилось изучение распро-
страненности, клинического и прогностического значения
у больных ДН протромботических генотипов, господствующих
в структуре врожденных тромбофилий.

Полиморфизм генов II, V факторов свертывания
крови и метилентетрагидрофолатредуктазы
у больных с диабетической нефропатией:
распространенность, клиническое
и прогностическое значение

Сибирева О.Ф., Хитринская Е.Ю., Калюжин В.В., Сазонов А.Э., Иванчук И.И., Гранкина В.Ю.

ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет, Томск 
(ректор – академик РАМН В.В. Новицкий) 

Цель. Изучение распространенности, клинического и прогностического значения у больных диабетической нефропатией (ДН) протром-
ботических генотипов, господствующих в структуре врожденных тромбофилий. 
Материалы и методы. Обследовано 90 пациентов с ДН, осложняющей в 54 случаях сахарный диабет 1 типа (СД1) и в 36 – сахарный
диабет 2 типа (СД2). Контрольную группу составили 100 здоровых лиц. Для диагностики однонуклеотидной замены С677Т в гене ме-
тилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), точечной мутации гена фактора V свертывания крови (FV), а также мутации G20210A
гена фактора II свертывания крови (FII) использовали метод полимеразной цепной реакции.
Результаты. Вероятность ДН у больных СД1 выше при наличии лейденской мутации, а у пациентов, больных СД2, она повышается
в связи с однонуклеотидной заменой С677Т в гене MTHFR и G20210A в 3′-нетранслируемой области гена FII.
Заключение. Изучаемые мутации, связанные с состоянием коагуляционного потенциала крови, встречаются у больных ДН с большей
частотой, чем среди здоровых лиц.
Ключевые слова: сахарный диабет, диабетическая нефропатия, полиморфизм генов, метилентетрагидрофолатредуктаза

Coagulation factors II,V and methylene tetrahydrofolate reductase gene polymorphism in patients with diabetic nephropathy:
prevalence, clinical and prognostic implications
Sibireva O.F., Khitrinskaya E.Yu., Kalyuzhin V.V., Sazonov A.E., Ivanchuk I.I., Grankina V.Yu.
Siberian State Medical University, Tomsk

Aim. To study prevalence, clinical and prognostic significance of prothrombotic genotypes pre-dominant in inborn thrombophilia in patients with dia-
betic nephropathy (DN).
Materials and methods. A total of 90 patients with DN were examined; 54 and 36 cases suffered DM1 and DM2 respectively. Control group comprised
100 healthy subjects. PCR was used to iden-tify single nucleotide substitution (C677T) in the methylene tetrahydrofolate reductase gene (MTHFR),
point mutation in coagulation factor V gene (FV), and G202210A mutation in factor II gene (FII). 
Results. The probability of DN in patients with DM1 increases in the presence of Leiden mutation and in DM2 patients in the presence of single nuc-
leotide substitu-tion (C677T) in MTHFR gene and G202210A mutation in the 3’-untranslated region of FII. 
Conclusion. The prevalence of the above mutations associated with blood coagulation potential in DN patients is higher than in healthy subjects.
Key words: diabetes mellitus, diabetic nephropathy, gene polymorphism, methylenetetrahydrofolate reductase

Генетика
Сахарный диабет

6

SD1_2010_01_Genetika_06_Blok  4.19.10  12:50 PM  Page 6

Сахарный диабет
Генетика

7
1/2010

Материалы и методы

В настоящей работе использованы данные, полученные при
обследовании в стационарных условиях (показаниями к госпи-
тализации являлись выраженная декомпенсация углеводного
обмена или прогрессирование сосудистых осложнений) 90 па-
циентов с ДН, осложняющей в 54 случаях СД1 и в 36 − СД2.
Программа исследования включала рутинные клинические
и лабораторные тесты, принятые в эндокринологической
и нефрологической клиниках. Клиническая ха ра ктеристика
обследованных больных представлена в таблице 1.
Для суждения о нормальных параметрах изучаемых пока-
зателей обследовано 100 здоровых лиц (контрольная группа)
с демографическими характеристиками, сходными с тако-
выми у больных СД1 [11].
Материалом для изучения частоты встречаемости однонук-
леотидной замены С677Т в гене метилентетрагидрофолатре-
дуктазы (MTHFR), точечной мутации (G1691А) гена фактора V
свертывания крови (FV), получившей название FV Leiden (лей-
денская мутация), а также мутации G20210A в 3′-нетрансли-
руемой области гена фактора II свертывания крови (FII)
послужили образцы геномной ДНК, полученной из лейкоци-
тов периферической крови методом фенол-хлороформной
экстракции. Для выявления полиморфизма гена FII и FV Lei-
den, а также для генотипирования варианта С677Т в гене
MTHFR использовали метод полимеразной цепной реакции
с по следующим рестрикционным анализом. Продукты ампли-
фикации и рестрикции разделяли с помощью электрофореза
соответственно в 2-процентном агарозном и 7-процентном
полиакриламидном гелях, окрашивая бромистым этидием.
В работе были использованы комплекты реагентов, включаю-
щие специфические праймеры и рестриктирующие эндонук-
леазы, любезно предоставленные сотрудниками группы
фармакогеномики (руководитель – М.Л. Филлипенко) Ин-
ститута химической биологии и фундаментальной медицины

СО РАН, г. Новосибирск. При статистической обработке дан-
ных применяли пакет программ «Биостатистика» 4.03. Коли-
чественные данные представлены в виде медианы – 25
и 75 процентилей (Ме [LQ;UQ]), качественные − в виде n, %
(число больных с данным признаком, процент от их количе-
ства в группе) или десятичной доли единицы. Нулевую гипо-
тезу о равенстве долей (в том числе соответствие
эмпи рического распределения частот генотипов по всем изу -
ченным локусам теоретически ожидаемому, рассчитанному
по формуле Харди-Вайнберга) проверяли с помощью крите-
риев χ2 и Ζ. Анализ повторных измерений проводили с помо-
щью критерия Вилкоксона. Силу связи между изучаемыми
количественными показателями и ее направленность выра-
жали через коэффициент ранговой корреляции Спирмена.
Для бинарных признаков по четырехпольной таблице вычис-
ляли отношение шансов (ОR) c 95-процентным доверитель-
ным интервалом (95% ДИ).

Результаты и их обсуждение

Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагмен-
тов позволил выявить в проанализированных образцах ге-
номной ДНК три генотипа полиморфного локуса MTHFR
(табл. 2). При этом установленное распределение генотипов
и частоты мутантного аллеля гена MTHFR во всех группах со-
ответствовало ожидаемому с учетом равновесия Харди-Вайн-
берга. Гетерозиготный вариант однонуклеотидной замены –
цитозина на тимин, приводящей к аминокислотной замене
аланина на валин, в положении 677 (С677Т) у пациентов с ДН
обнаруживался чаще, чем у здоровых. При этом у больных
СД2 различие с контрольной группой по встречаемости дан-
ного протромботического генотипа достигало уровня стати-
стической значимости.
Как известно, полиморфизм С677Т в гене MTHFR насле-
дуется по аутосомно-рецессивному типу и сопряжен с нару-
шением реметилирования гомоцистеина и, как следствие, –
с развитием гипергомоцистеинемии − одного из ключевых
факторов риска гиперкоагуляционного синдрома и ангиопа-
тии [12]. У больных хроническим гломерулонефритом гете-
розиготный генотип С677T ассоциируется с высоким темпом
утраты функционирующих нефронов и быстрым развитием
терминальной стадии почечной недостаточности [13–14].
Результаты настоящего исследования позволяют обсуж-
дать связь гетерозиготного варианта полиморфизма С677Т
гена MTHFR у больных СД2 с формированием патологиче-
ского фенотипа заболевания с поражением почек, так как
у пациентов с однонуклеотидной заменой в гене MTHFR
чаще (χ2=5,8; p=0,016) диагностировали IV стадию ДН
по классификации Mogensen С.Е. и соавт. (1983), а 95% ДИ
(1,29; 6,06) OR (2,84), располагающийся справа от единицы,
указывает на то, что шанс развития ДН статистически
значимо выше у пациентов с генетическим дефектом. Уро-
вень гомоцистеина в крови больных СД с точечной мутацией
в гене MTHFR превышал 15,0 ммоль/л и был взаимосвязан

Таблица 1

Клиническая характеристика обследованных больных

Показатель
Пациенты с СД1
(n=54)

Пациенты с СД2
(n=36)

Возраст, годы
31,5 (25; 47)
60,0 (54; 68)

Мужчины /женщины, n (%)
28 (52) / 26 (48) 10 (28) / 26 (72)

Длительность СД, годы
12,0 (7; 19)
13,0 (7; 20)

Степень тяжести СД, n (%)
Средней степени
Тяжелое течение

18 (33)
36 (67)

10 (28)
26 (72)

Стадия ДН, n (%)
III
IV

16 (30) 
38 (70)

8 (22)
28 (78)

Индекс массы тела, кг/м2
23,1 (20; 27)
29,0 (25; 33)

Скорость клубочковой
фильтрации, мл/мин
82,0 (76; 89)
83,0 (76; 90)

Таблица 2

Примечание: здесь и в таблицах 3-4* – статистическая значимость различий с контрольной группой (*– р<0,05; ** – р<0,01).

Распределение частот генотипов и аллелей С677Т гена MTHFR у здоровых и больных с ДН

Группа обследованных

Генотипы
Частоты аллелей

С/С
С/Т
Т/Т
С
Т

Контрольная (n=100)
63 (63%)*
31 (31%)**
6 (6%)
0,79
0,21

ДН (n=90), в том числе у больных:
• СД1 (n=54)
• СД2 (n=36)

42 (47%)*
27 (50%)*
15 (42%)*

45 (50%)**
24 (40%)**
21 (58%)**

3 (3%)
3 (10%)
–

0,72
0,72
0,71

0,28
0,23
0,29

SD1_2010_01_Genetika_06_Blok  4.19.10  12:50 PM  Page 7